過度糖化最終產物刺激 C6 神經膠瘤細胞表現誘導型一氧化氮合成酵素 之訊息傳遞路徑
在阿茲罕默氏症（ Alzheimer’s disease ）及其他許多退行性神經病變中，誘導型一氧化 氮合成酵素（ inducible nitric oxide synthase ，簡稱 iNOS ）的活性扮演著重要的角色，
而 iNOS 的蛋白表現會受到 mitogen-activated protein kinase （ MAPK ）的調控。我們在 實驗中，以過度糖化最終產物（ BSA-AGEs ）誘導 C6 神經膠瘤細胞（ C6 glioma cell s ） iNOS 的蛋白表現，發現 p38 MAPK 在其訊息傳遞過程扮演相當重要的角色。利用 BSA-AGEs 刺激 C6 glioma cells ，不論是隨著劑量的增加或是反應時間的增加， iNOS 的蛋白表現以及一氧化氮（ NO ）的產生都會隨之增加，而這種現象可以被基因轉錄抑 制劑 actinomycin D ，基因轉譯抑制劑 cyclohexamide ，和 iNOS 抑制劑 Nw-nitro-L-argi nine methyl easter （ L-NAME ）所抑制，由此可以推測 iNOS 的蛋白表現是由基因表現 而來，而 NO 的增加則是由於 iNOS 的正調節作用（ up-regulation ）所致。另外，預先 以 tyrosine kinase 抑制劑（ genistein 和 tyrphostin ）、 Ras-farnesyl transferase 抑制劑 -II
（ FPT-II ）、 p38 MAPK 抑制劑（ SB203580 ）及 MEK 抑制劑（ PD98059 ）等處理 C 6 glioma cells ，都可以抑制由 BSA-AGEs 所刺激的 iNOS 表現及 NO 產生。 BSA-AGEs 可以促使 C6 神經膠瘤細胞 p38 MAPK 的活性增加，而此一現象會被 genistein （ 20m M ）、 tyrphostin （ 30mM ）、 FPT inhibitor-II （ 20mM ）和 SB203580 （ 10mM ）所 抑制，另外， BSA-AGEs 也可以促使 ERK 的活性增加，相同地，也會被 genistein （ 3 0mM ）、 FPT inhibitor-II （ 20mM ）和 PD98059 （ 10mM ）所抑制。綜合以上結果，
我們的研究顯示， BSA-AGEs 在 C6 glioma cells 中的訊息傳遞路徑是經由活化 tyrosine kinase 和 Ras ，導致 p38 MAPK 及 ERK 的活化，而進一步的促使 iNOS 表現而產生 NO 。
Signal Transduction of Advanced Glycosylation End Products(AGEs) Stimulated Inducible-Nitric Oxide Synthase Expression in C6 Glioma
Cells
Inducible nitric oxide synthase (iNOS) activity plays important roles in Alzheimer’s disease a nd other neurodegeneration diseases. The mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway i s believed to function as an important mediator of iNOS expression. In the present study, we i nvestigated the role of the p38 MAPK signaling pathway in advanced glycosylation end produ cts (AGEs)-induced iNOS expression in C6 glioma cells. AGEs caused a dose-dependent incre ase of nitrite accumulation in C6 glioma cells. The AGEs-stimulated nitrite production from C 6 glioma cells was inhibited by actinomycin D, cycloheximide, and the NO synthase inhibitor, Nw-nitro-L-arginine methyl ester (l-NAME), suggesting that the increase of AGEs-induced nit rite release is due to iNOS up-regulation. Consistently, treatment of C6 glioma cells with AGE s induced iNOS protein expression. The tyrosine kinase inhibitor (genistein & tyrphostin), the Ras-farnesyl transferase inhibitor (FPT inhibitor-II), the p38 MAPK inhibitor (SB203580), or t he MEK inhibitor (PD98059) suppressed AGEs-induced iNOS expression and nitrite release fr om C6 glioma cells. AGEs activated p38 MAPK in C6 glioma cells, and this effect was blocke d by genisteine (20 mM), tyrphostin (30 mM), FPT inhibitor-II (20 mM), and SB203580 (10 mM). AGEs also activated ERK in C6 glioma cells, and this effect was blocked by genisteine (30 mM), FPT inhibitor-II (30 mM), and PD98059 (10 mM). Taken together, our data suggest that AGEs may activate the pathways of tyrosine kinase and Ras to induce p38 MAPK and ER K activation, which in turn induces iNOS expression and NO production in C6 glioma cells.
