Konya bölgesinde bulunan gökkuşağı alabalığı (onchyrnus mykiss) çiftliklerinden lactococcus garvieae izolasyonu, identifikasyonu ve fenotipik özelliklerinin belirlenmesi

v

cl.BiL.Dcrg.(2007) , 23,ı:7·ı7

KONYA

BÖLGESİNDE

BULUNAN

GÖKKUŞACiı

ALABALlGI (O

nchyrnus mykiss)

Ç

İFTLİ KLERİNDEN

Lactococcus garvieae

İZOLASYONU

,

İDEN

TİFiKASYONU

VE

F

ENOTİpİK

ÖZELLİKLERİNİN BEL

İRLENMESİ

Kürşat

Kav@

1

Osman

Erganiş1

Iso

lation,

Identifica

tion

and

Ph

enotyp ic C

haracterization

of

Lactococcııs

garvieae

from Rainbow Trout

iOııclıyrıı us

m

yk iss )

Fisheries in Konya Region.

Özet: Buçalışmada, Konyabölgesinde gökkuşağı alabalığı çitttikler indeStreptokokkozisetkeniolan Lactococcusgar

-vieae'nınizolasyonu,identifikasyonu ve lenotipiközelliklerinin belirlenmes iamaçlandı.Haziran 2002-Ağustos2004yıl­ ları arası nda hastalığın görüldüğü 6 adet gökkuşağı alabalığı çiftliğinden 180hastalı klı balık toplandı. Balık örneklerin 30'unda

L.

garvieaesal kültür halinde izole edildi. Etkenin belirlenmes inde APı 20 Strep,klasik bakteriyolojik y

ön-temlervepolimeraz zincirreaksiyonu (PZR) kullanıld ı. Sonuç olarak bölgeselStreptokokkozis etkenin

L.

garvieaeol -duğu ,tespit edilenizolatlannisefenotipiközelliklerinegöre homojen vekapsüllüolduğubelirlendi.

AnahtarKelimeler: Streplokokkozis,Laclococcus garvieae,Gökkuşağ ıAlabalığı , PZR,APı20 Strep

Summary: The aim ol this study was to determine isolation,identification and phenotypic characteriz ation ol Lee -tococcus garvieaewhich is cause ol Slreplococcosis in rainbow troutlisheriesin Konya region. Between june 2002

andAugust2004,180 iIIlishwere obtainedIrom6rainbow trout fisherieswherethe diseasewas observed.Out ofthe fish samples,30

L.

garvieae isolates wereisolated.APı20 Strep,polymerasechain reaction (PCR)andclassical

bac-teriologicaltechniqueswereused the identificali on of agents. In conclusion, it has been determ inatedthattheloca/

L.

garvieaestrains were homogen and havecapsulelormalions regard phenotypiccharacterizations.

Key Words: Streptococcosis,Lactococcus garvieae,Rainbow trout,PCR.APı20 Strep Gi riş

Strepıokokkozis

ve/veya

Streptokoksikozis

ol

arak da

i

simle

nd

i

r

il

en enfeks

iyon,

su ürünlerinde

Str

eptococcus

ve En/erococcus cins

inde

yer alan

ba

kteriler

L.

garvi

eae

(syn

.

En/erococcus

se-r

iolocida),

Streptococcus iniae

(syn. S.

shi/oı) ,

S

.

ag

alac/iae

(syn

.

S

.

difficile)

,

S

,

parauber

is,

S. mi/

-le

r

i,

L.

pisc

ium

ve Vagococcus salmon

inarum

ta-raf ından oluşt u ru lan

s

eptisemik

ve epizoot

ik

ka-rak

terli bi

r

hastal ı kt ı r

(

Eldar

ve ark 1996, Austin ve

Au

st

in

1999

,

Belton 2002)

.

Hastalık

özell

ikle

ba-lı kları n

m

erkezi

s

inir

s

istemini

e

tkileyerek

me-n

i

ngoensefalitis v

e

s

uppurat

if

ekzofta

lmusa

neden

olmas ı

i

le

tanınmaktadır

(E

ldar

ve ark 1996,

A

ust

i

n

v

e

A

ust

i

n

199

9,

B

elton

2002). Enfeks

iyonun

L.

gar

-v

ieae,

S.

i

niae

,

S.

aga

lac/iae

ve S

.

parauberis

ta

-rafından oluşturula n sıcak

su Streptokokkoz

ls'i

(ge

-nellikl

e

s

u

sıcakl ı ğını n

15

°C

'nin

üst

ünde

oldu ğu şartlarda)

v

e

L.

p

iscium

il

e V

ibrio

salmoninarum

ta-raf ı ndan oluşt u rulan soğuk

su S/reptokokkozis

'i

(su

sıcaklığ ının

15

°C

'nin

altında olduğ u şartlarda)

olmak üzere y

üksek

morta

liteyle

s

eyreden 2 f

or-munun

olduğu

bild

ir

ilmekted ir

(Afonso ve ark 200

3

,

Toranzo ve ark 2005)

.

Streptokokkozis

il

k kez Japonya

'da

1958

yı :

Iında gökkuşağı alabalıklarında

ent

erokok

c

insi

b

ak-teri

ler

tarafından oluşturulan

b

ir

hasta l ık

o

larak bi

l-diri lmiştir

(Aust

in

ve A

ustin

1999)

.

G

ünü

m

ü

ze k

adar

çeşitli

kü

lt

ür

balığı

tür

lerinde

gökkuşağ ı alabalığı

(Oncorhynchus mykiss)

,

ye

llowtail

'

lerde (

Seriola

quinqueradia/a),

tilap

ia'larda

(Sarotherodon

ga

-liIaeus),

coho salmon

'da

(Oncorhynchus k

isutch),

ayu

'da

(Plecoglossus a/tivelis),

catf

ish

(Ictalurus

punctetus)

,

s

ilver

trout, s

ea

trout (Sa/m

o

trutta

L.),

stingray

(Pot

amotrygon

f

aikneri)

v

e

s

tr

i

ped

bass

'larda

(M

orone c

hrysops X M s

axatilis

)

rap

or

edi lm iştir

(Aust

in

v

e

Aust

in

1999).

Ayrı ca,

bü

y

ük

k

a

-r

ides

(

freshwater

p

rawn=Macrobrachium

ro

-senbergii)

çi

ftl

ikler

inde

de

hastalığın

c

i

ddi ekonom

i

k

kayıplara

sebep

olduğu

b

ildirilmektedir

(Ch

eng

v

e

GelişTarihi: @:ka v@s elcu k.ed u.ır

*

Bu makale Selçuk üniversitesi Araştı rm a Fonu tarafından desteklenen (BAP 2002/003 nolu ) "Gökkuş ağı Alaba h kl arı ru n

(On-COI'lIYll c/IIIJ ıııykiss,Walbaum 1792 )Streptokokkozis(Lacıococcıısgarvieae) Hast af i ğ ina Karşı Aş ı Çnlış m alan " isimlidokuıra tezinin

bir bölümü.alınarak baz ul nn mr ş ur.

KA\',ERG t\ NI Ş

a

rk 2

003).

Dünyanın diğer

b

ir

ç

ok

ü

lkesinde

(Kore,

G

üney

Afri

ka , lsr

atl.

Am

e

rika

Birleşik

Dev letleri,

Avu

s

tra

lya) s

treptokok veya strept

okok'a

benzeyen

mikroorganizmaları n

s

u ü

rünle

ri

iç

in

öneml

i

b

ir

ıeh­

di

l

un

suru h

aline

geldiği

be

lirtilmekte dir

(E

ldar

ve

ark

199

6

,

A

us

t

i

n v

e

Au

stin

1999

,

Al

o

n

sa

ve ark

2

003)

.

Avrupa

'da i

se Strept

okokkozis

ö

zellikle

I

s-p

anya, Ingil

tere v

e

_ıtalya'da

b

ir

ç

ok

_balık

türünde

%

50'yc

var

an

mortal

i

t

ey le se

yreden enfeksiy

onlar

yapmaktadı r

(

Ellis

198

8,

E

ldar

ve ark

1996,

Alo

nsa

v

e a

rk

2003)

.

Ül

kemizde, L. garvi

eae

2001

_{yı l ı nda}

E

ge

bÖl

gesinde ki

gökkuşağ ı aıabal ığ ı

ç

irtliklerinden

i

zole ve

iden

tiliye

edilmiştir

(Dife

r

ve ark 2

002).

L.

g

arvieae

tarafı ndan oluşturulan

sueo

-t

okokkozis

en

feks iyo nu ,

Enter

ok okk ozis

veya

la

ktoko kko zis

ola

rak da

tanım l anmaktadır

(

Eldar

ve a

rk 1

996,

Aus

ttn

ve Au

stin

1999

,

Afons

o

ve

ark 2003)

.

L. g

arvieae,

Str

ept oc occus

cinsi bak

-t

erilerin ka

rakte

ristik

ö

zellikle rini göste

ren Gram

po

zitif,

kapsüll

ü v

eya

k

apsüls

üz

olabi

len s

porsuz

bi

r b

akter idir.

Z

oon oz

b

ir

hastalık

o

lan

Lak-tc

kck kozis:

balıkla rd a

septi

semi

ve

mo

-nm

qoensetalüise .

mandalarda

subk

lin ik

m

as-tttise.

insanla

rda

pn

ömoni,

o

steomty etü

ve

sekunce

r

ola

rak da endoka

rd

itise

y

ol

a

çar

(Eldar

ve ark

t

996

. T

eix ena

ve

a

rk

19 9

6,

Fefer ve ark

199

8

,

Z

latkin v

e a

rk

1

998

,

Ja

mes ve ark

2

000

,

At

onso

ve

a

rk 20

03). J

aponya'da

sarı

kuy

-r

uk'la n n (yeüo

wtatl) e

n ö

nemli bakter

iyel

hasta lık

e

tkenlerinden b

ir i o

lan

L.

garv

ieae

aynı

zamanda

t

uzlu

v

e

tatlı

s

u

balıkları

iç

inde o

purtunisti k b

i

r

pa

-t

ojend ir (Okoda v

e

a

rk

2000

,

O

oyam a

ve ark

2002).

L.

çasvıeee gökkuşağı alabalıklarında

(özel-likle ya

z

aylarında

s

u

sıcaklığın ı n

15-22°C'ye

ulaş­ tı~ı

z

amanlarda) %60

-80

oran ınd a morıauteve

sebep

olma ktad ır

(

Eldar v

e

ark

t

999, Diler ve ark

2002

,

Al

onso

v

e

ark

200

3, T

oranz o

ve ark

2005

).

B

aktenyolofik

ve

mo

leküler

çal ışmalar

(Zlctktn

v

e

ark

1

9 98

,

D

iler

ve ark

2

00 2)

L.

garvieae'nın

g

ö

k-kuşağı alabahğı yetiştiriciliğinde

hem

o

ra

jik

sep-tis

cmln!n .

biline

n

adıyla

göz

urtarnası

(

po p-eye)

hastalığının eliyoıojisinde

y

er

aldığ ını

o

rtaya k

oy-muştur

(

Atonsc

ve

ark 2

003)

.

Hastalığı n

bilinen

e

n

genel semp

tomu

ek

zottalmusurr.

Bazı

v

akalarda

peno

rbitat

do

kuda

e

ksuoa

t

birik

imi

gö

rülm

ekle b

ir-likt

e genelli

kle g

özün

kayb ıyta sonuçlanmaktadır

(

Alonso

ve a

rk 2

00 3),

Di~er

s

emptomlar

l

sc

a

b-oornin

al

ge

rginlik

,

g

özl erde

h

emoraji. o

parkura ve

y

üzgeçlerin

Ia ba n ı

Ile

vü

cut

y

üzey inde

Ill-sera

syonlar

ve de

ride

kararmalardır

(

Oiler v

e

ark

200

2, Al

onsa ve ark 200

3).

S

treptokoktarm

l

aktik

g

rubu iç

inde

y

er

a

lan

S

.

6

m

e

t

is.

S

.

crem

oris

gib

i b

aktenler.

L

ac

l

ococcu

s

ge

-n

usunun

kurulmas ıyla

bir

likte bu

y

eni

gr

uba dah

il

ed ilmişlerdir

(

Teixei

ra v

e

ar

k

1

996)

.

Bu

ge

nusa

ek-l

enen l

ürlerden

bir

tanes

i

d

e

L.

garvieao'di

r

(

Austm

ve A

ustin

19

99)

.

Bu tür

il

k

olarak mandala

rda su

bk-linik ma

stitis

vakalarından

iz

ole

edildi~i

i

çin

,

ilk

dö-nemd

e

S

. ga

rvieae

o

larak

adlandırılmıştır.

E

n-t

e

r

c

k

c kla

nn

i

dentiükasyon

v

e

klasifikasyonu

çalışmalarında

ente

rokoklann t

ür ö

zelliklerini

ç

ös-t

ermeyen

ve b

i

r

birinden

fa rkl ı

çok

sayıda

Gram p

o-z

ilif

kok

tanımlanm ı ştır

(

Teix eim v

e a

rk

1

996).

D

NA

v

e

rRNA

se

kans öze

lliklerine

g

öre

L.

ıectis

subsp

.

ıecus

ve

L. garvieae'nı n

b

irbir inden

ayrı

t

ür

Olduğu

k

esin ola

rak

belirlenmiştir

(Teixefr

a v

e ar

k 1

996,

H

al

l 1

9

97

)

.

L.

garvieae

,

y

uvarlak

veya

ova

t

yapıda

(0.5-0.6

Ilm

)

,

Gram p

ozitif,

lla g e llasız,

h

areketsiz,

spo

rsuz,

tck ya da

kısa ztncuter oluşturan

b

ir

k

oktur.

L.

çsr-v

ieae

enfek

te

balık

i

ç

organları ndan

(

dalak.

böbrek

ve beyin),

farklı

be

si

ortamla rı

Bra

in

H

eM

I

nf

u

s

io

n

Ag

ar

(BHIA)

, %

1

maya

ekstrakılı

v

e %5 glukozlu

Tr

iplan

So

ya

Agar

(TSA)

v

eya

kanlı

ag

arda

22°C

'de 2

-4

gün i

nkubasyon

s

onucunda iz

ole ed

i-leb

ili

r

(

Sneath

1

986,

Teixetr

a

v

e ark

t99

6.

H

all

1

9

97

,

Af

onso

v

e

ark

200

3).

L.

garv/eadnın

t

O-45°C

gi

bi

geniş

b

ir

sıcaklık aralığında üredi~i,

en

i

yi ür

e-m

eni

n 30

"

C'

de

gerçekıeşti~i,

t

uzsuz ve/veya

%1

-G.5

tuz

konsantrasyonları

içere

n

bes

i

yer

lerinde

Oreyebildiği bild iri lmiştir

(Teixetr

a

v

e

ar

k

1

996, H

olt

1997.

A

ustin

ve Au

stin

1

999,

Af

o

n

so

v

e a

rk

2003)

.

TSA'd;ı

25°C

'de

48

s

aatte 0.

2

-

0.5 mm

çapı nda

dü

z,

tıafif

k

onveks

,

kabarık.

y

uvarlak, bey

az

ile k

rern

re

n

g

i

n

de

yarı şeffaf

k

cle niler

oluşturmaktadı r.

Et-k

enin %5 k

oyun

kanlı

a

pardaki k

ültürü

n

de koloniler

etrafı nda ce-nemoüz şekütenrnekteoir

(Teixerr

a v

e

a

rk

199

6,

Al

onsa ve a

rk

2003

).

Sıreptokokkozis hastalığ ın a

s

ebep

olan m

ik-roorganizmala rı n

b

iyokimyas al v

e mortorojik

öz

el-li

klerine

göre

cin

s

ve t

ür

d

üzeyinde

tan ımlamaları yapı labildiğ i ,

bu

n

edenle

t

ür

düze

yinde

ta-nımlaman ın

en

feksiyonun

etoıojst

l

çln gerekl

i 01

-du~u bildirilmiştir

(

Faeklam v

e

Elliaıı

1

995).

A

ncak

salg ı nla r esnasında

izole e

dilen

aynı

t

ur

i

çindeki bir

çok

suşun

b

irbiri ile

akrabalı k ilişkis inin

o

lup

ol

-madığın ı

b

elirlemek ve

do~ru aşı lama stratejilerinın qellştirllmes i

için

l

ür i

çinde

farkl ı lık

veya

suş sı­ nıflandırması

ol

arak

ifade edilen tlpte

nctrmece

bazı

I

e

nottptk

v

e

g

enotlpik

ö

zelliklerden

de

ya-rarlanılmaktadır

(Fa

cklam

v

e

ElJioıı

1

995

, Af

onso ve

ark 2

003)

,

R

apid 1

0

3

2 Strep v

e

APı

20 Strep

t

estleri ile

edi-Konyu BüI~csindcBulunan Giikkl1ş:ı~1Alııhalı~ı...

le

bilmektedir. A

ncak bu

t

estler

Streptokokkozis

'in

e

tiyolojik etk

enlerini birbirinde

n k

esin

olarak

ayı­ ramama ktad ı r

(T

oranzo

v

e ark

2005)

.

N

itekim

L.

garvieae

i

le

L.

lecıis

subsp

.

lecıis

veya

S

.

iniae

il

e

S

.

uberis'in

b

iyok imyasal

t

est lerinin

benzerliğinden dolayı

b

u t

estlerle

ayırt edilemediğ i bildirilmişt ir

(Faeklam

v

e Elll

ot 1995, Bascomb ve Man

afi

1998

,

T

oranzo ve a

rk 2005)

.

F

eno

t

ipik

ola

rak

L.

garvieae'nın

b

iyok

imyasa

l

(sakkaroz.

ıaçaıo z.

mannitol, siklodekstr

in

vs) ve

enzim

APı

20

Str

ep

ve

APı

50 CH (p

irog lutamik

as

it

arilam

ida

z,

N-

asetil-a-glukozaminidaz

vs

)

t

estleri ile

İtalya n

ve J

apon

(b

iyotip

1)

,

Avustra

lya

(b

iyotip

2

)

v

e Is

panya

(bi

yotip 3) olmak üzere 3

farklı

b

iyot ipinin

v

e

s

erolojik

olarakta KG· (

kap-sü

llü)

ve

KG

+ (

kapsülsüz) o

lmak

üzere

2

se-rotip

inin

old u ğu

bildirilmek

tedi r (E

ldar

v

e

ark

1

999).

Epide

miyolojik

ça lı ş malar

(

Vela ve a

rk

2000)

balıklardaki sıreptokokkozis hastalığ ı n ın

et

-kenler

inden

bi

ri olan

L.

garvieae

suşlarının

f

enotipik

ve

geno

t

ipik

farkl ılıklar gösterdiğ ini

o

rtaya koy

-muştur.

V

e

l

a

v

e a

rk (2000)

,

çeşitl i

ül

kelerden t

emin

ed

ilen

ve

fa rklı balık

türlerinden

i

zole e

dilen

L.

gar

-vieae

suşlarını

Restrietion Fragment Length

Po/y-morphism

R

ibotyp ing

(PFGE)

tekni ğ i

il

e

in

-celediklerinde, g

enelik

ola

rak

farklılık

göst

eren

19

pulsotipini

saptam ış la rd ır.

Ravel

o

ve

a

rk (2003

),

değ işik

ül

keler

in

işletmelerindeki balıklardan

izo

le

ed il miş

57

a

det

L.

garvieae

izo

latmm R

APO·PZR

an

alizi ile

A, B v

e

C

olarak isimle

ndirdikleri 3

farklı

geno

mik gru

p

v

e

1

0

farklı

RAPO profil tespi

t

et

-mişlerd i r.

Aş ılamanın

la

ktokok kozis

il

e

mücadelede

e

tk

in

bir

yololduğu

be

lirt ilmektedir (

Romalde v

e

a

rk

2004). B

ununla birl

ikte

aş ı la manı n başa rıs ı ko -nakçıdaki

t

ür

e.

uygulama yoluna ve

ku llan ı la n

a

d-juvanıın

t

i

pine

g

öre

değişmektedir

(Af

onso

v

e ark

2003)

.

Alabalıklarda

bu

hastalığa karş ı

u

ygulanan

t

icari

aşıların etki n liği ni n düşük olduğu

v

e

k

oruma

süresi 3

-6

ay a ras ı nda değiştiğ i

be

lirtil mekte dir

(Af

onso v

e

ark

2003. T

oranzo

v

e

ark 2005

).

Et

kili

aşılama

s

tratejilerinin

gelişti rilebi l mesi

i

çin

strep-tok

okkozis

hastalığına

ne

den olan bö

lgeselolarak

yaygı n

L.

garvieae

izolatlarının saptanması

ve bu

tür

lere

ka rşı

e

tkil

i

k

oruma önle

mlerinin

alınması gerekt i ğ i

b

ild

i

rilmektedir (

Ravelo ve ark 200

3,

Ho-m

alde

v

e ar

k

2004).

Bu

çalışmada

K

onya ili

ve çevres

indeki

gök

-kuşağı alabalığı

ç

iftliklerinde ö

zellikle y

az

aylarında

Streptokokkozis'e

neden o

lan

L.

garvieae'nın

izo-lasyonu,

ide

ntifikas

y

onu

ve

b

ölgese l

yaygın suş

'unun belir

lenmesi

amaçlanmıştır.

9

M

ateryal

ve M

etot

Bal ı k

Ö

rnekleri

Bu

araştırma ,

Konya

i

li ve çevres

inde

alabalık

üret

imi ile

yetiştiriciliği yapılan

ç

iftlik lerdeki

gök-kuşağı alabalıkları

ü

zerinde

yapıldı . Balık

örn

ekleri:

su

sıcaklığında

ö

nemli

değişimle rin gözlend iğ i

il

k-bahar,

y

az

v

e sonbahar

ayla rında

'pop eye'

send-romu gösteren

bal ı kların bulunduğu

ç

iftliklerden

alındı.

Bu amaç

la

6 a

det

gökku şağ ı alabalı ğı

çift-liğinden

Haziran

2002-Ağustos

2

004

ta

rihlerini

kap-sayan 2

yı llık

s

üre i

çerisinde

1

80 adet

hastalıklı

ala

-balıktopland ı .

H

er çi

ft/ikten

alınan

80

-180

9

arası ndaki 6'şar

a

det

hastalı klı alabalığı canlı

o

larak laboratu

vara

ge

tirmek

amac ıyla

20 li

trel

ik

poşetlerin

1/3'üne

kadar s

u

diğer kı sma

i

se oksijen v

erilerek

ağızları

buru

lmak

s

üretiyle

kapatıldı.

l.aboratuar

a

ca nlı

ge

-tir

iten

balıkların

ot

opsileri

yapılarak

asep

tik

ko-şullarda alınan

m

arazi

mad

delerden

(g

öz,

ka-raciğer, dalak ,

ka

lp

v

e

b

eyin) %

5

'

lik koy

un

ka n l ı

agar'a ve TSA

'ya

e

kimleri

yapı larak

28

°C

'de

24

-48

saat aerob

ik

o

larak in

kübe

edıldi.

Ür

eyen

t

ipik

u -lıemolizli

kolon

iler

seç

ilerek

o

ksidaz

v

e ka

talaz

test-l

eri ile Gram boyama

yapıld ı .

O

ksidaz

ve katalaz

negat

if

Gram (

+)

bakteri

lere,

r

eferans

suşlarla ba -lıkla rdan hazırlanan

anti

L.

garviea

hiperimmun

s

e-rum

u

ile la

m agl

ütinasyon

t

estleri

yapıld ı.

K

on-v

ansiyonel bak

teriyolajik ve

APı

20 S

trep estleri

il

e

L.

garvieae' n ı n

i

dentifikasyonun ta

m olarak ya

-pıla mama s ı

nedeni i

le

i

zole ed

ilen

tü

m

suşların doğ·

rulanması amacıyla

Zlotk

in

v

e ark

(

1998)

önerdiğı

PZR y

öntemi

uyguland ı.

Kaps

ül

varlığ ını n

be

lirlenmes i

lzoıattarda

k

apsül

varl ığı

b

elirlenmesi

amacıyla

L. garv ieae

cuştan

%

5 d

efibrine ko

yun

kanı

i

lave

edilmiş

TSA

'ya

e

kilerek (

Oxoid, CM 131

),

24

°C

'de

48 saa

tte

üret

ildi.

Suşlara

ait kolaniler

0,

5 m

l F

osfat

tampon solüsy

onunda (

pH 7

.4) süspanse e

dile rek

eşit

m

iktarda

f

ikzasyon solüs

yon undan

(

100mM

L-Iis

in

HCl

i

çeren

%

2

,5 l

uk g

luteraldehit) il

ave ed

ildi

ve 20

d

akika

oda

ısı sında

be

kletiidi.

Bu

so

-lü

syondan yuv

arlak

u

çlu

ö

ze

i

le b

ir ö

ze d

olusu

alı­

n

arak

lam üze

rine

yay ıldı

v

e kurut

uldu.

Hazı rlana n

p

reparat basik

fu

ksin

i

le

3 dak

ika

boyandı

ve

yı ­

k

anarak

kurulandı. Işık

mikroskob

unda çe

vres

i

h

ale

ta rz ı nda

boya alm

ayan

kırmız ı

boy

anan bakt

eriler

k

apsül

y

ününden p

ozitif olarak

değerl endirildi

(

Ça-ğırga n

2004).

Bul

gul ar

Izo!e ed

ilen

L.

garvieae

i

zolatları

v

e

y

ıllara

g

öre

dağılımı

KAV. ERGA Iş

L. garvieae

Suşları

Araştırmada, 2002-2004 yılları arasındaKonya

ili ve çevresindeki alabalık çiftliklerinden izole ve

identifiye edilen 30 adet

Lactococcus garvieae

saha suşu ve 2 adet referans suş

(L. garvieae

ATCC 49156,

L. garvieae

NCOO 2155) olmak

üzere toplam 32 adet suş kullanıldı (Tablo1). Referans suşlar

L. garvieae

ATCC 49156suşu Dr. Chan Lee (Kore) ve

L. garvieae

NCOO 2155 suşu ise Dr. Jesus

L.

Romalde (Santiago , Com-postela, Spain)'densağlandı.

Tablo 1.L.garvieaeizolatlarınınkaynaklara veyıllaragöredağılım ı

Kaynak 2002 2003

Pap i l alKaş ören ST"-l ve ST-2 ST-3 ve ST-4 Beyköy/Cihanbeyli ST-? ve ST-8 ST-9 ve ST-lO ZengilSarayönü ST-13ve ST-14 ST-15 ve ST-16

Aydoğdu/llgın ST-ıgve ST-20 ST-21 ve ST-22

FETA l aba l ı k/S elçukl u ST-25 ve ST-26 ST·2? ve ST·28

Hatı p Alab al ıkTesisleri/karatay ST-29ve ST-30 Kore ATCC 49156 Ispanya GenelToplam 10 13 2004 Toplam(adet) ST-5 ve ST·6 6 ST-ll ve ST-12 6 ST-17 ve ST·18 6 ST-23 ve ST-24 6 4 2 NCDO 2155 9 32

·STesuş,ATCC 49156 ve NCDO 2155;L.garvieae'nınreferanssuşlarıdır .

L. garvieae

suşlarınınkapsül varlığının

Konya ili ve çevresinden izole edilen

L.

gar-vieae

izolaııarı n ın (ST1-ST30) tamamıve kullanılan

r~ferans suş lar

(L. garvieae

ATCC 49156 ve

L.

gar

-vıeae NCOO 2155) kapsül yönünden pozitif bu-lundu .

L. garvieae

suşların ın mikrob iyolojik tesııeri

Mikrobiyo lojik testlerle ilgili sonuçlar (Tablo 2) incelend iğ inde. izol e edilen

L.

garvieae

suşları ile referans suşla rı n fenotipik özelliklerinin büyük öl-çüdebenzerolduğu, ancak karbonhidrat testlerinde

(O-galaktoz, laktoz,mannitol, raffinoz, sakkaroz,ve L-Rhamnoz)farkl ı l ıklarolduğugözlendi (Tablo3).

L.

ga

rvieae

ATCC 49156 ve

L.

garvieae

NCOO

2155 nolu referans suşların

0

-

galaktoz, laktoz, raf-finoz , sakkaraz ve L-rhamnoz test sonuçları kar-şılaşt ı rı ldığında

L.

garv

ieae

ATCC 49156 negatif

bu-lunurken

L.

ga

rviea e

NCOO 2155'in sadece

mannitol testineg atifolarak tesp itedildi(Tablo2 ve

10

3)

.

L.

garvieae'nın saha suşlarının O-galakto z,

mannitol,sakkaroz testleripozitifve laktoz,raffinoz

ve rhamnoz testleri yönünden negatif olduğu ,

L.

garvieae

saha suşları ile

L.

garvieae

NCOO 2155'in

O-galaktoz, mannitolve sakkaroz test sonuçları yö-nünden ileaynıolduğutespit edildi.

L.

garvieae

suşlarının APı 20 Strep testi so

-nuçları

APı 20 Strep test sonuçlarına göre,

L. g

ar-vieae

ATCC 49156 ve

L. garvieae

NCOO 2155

suşları arasında karbonhidrat (inülin, raffinoz , la

k-toz, arabinoz) testlerinde farklılıklartespit edildi.

L.

garvieae'nın saha suşlarının (ST1-ST30) fenotipik

özelliklerininbenzer bulundu (Tablo 4).

Mini APı reader aracılığı ile testler 4 saat i n-kübasyondan sonra okutulduğu zama n ide

n-tifikasyonda izolatlar %66.4 oranında

L.

/a

ctis l

ee-tis

,

%29.1 oranında

E.

feaca/is

,

%3.7 oran ında

E.

KonyaHii1ı: cs i nd clIulun an Gii kku şa eı Alubalı ğı.. ,

Tablo2,

L.

g

arviaaa

suşları nı nkültürelvebiyokimyasaltestlerkullanılarakbelirlenenlenatipiköz eıı i kl e r

Fenatipikôzeuıkıer ATCC49156 NCOO 2155 ST1-30

Gram Boyama + + + KcleniFormu S S S Hareket

"

"

"

c-Hemoliz

_•

•

_•

OIF

_•

_•

_•

Oksidaz

"

_"

_"

Katalaz

"

"

"

MacConkey'doÜreme

"

"

"

TSA+%l YeaslExtract'deÜreme

_•

_•

_•

TS8. BHIve NA'deOreme

_•

_•

_•

KanlıAçar

_•

_•

_•

MehlRed

_•

_•

_•

H2S

"

"

"

Tuzsuzpeptonlusu

_•

_•

_•

%2.5NaClpeptc nıusu

_•

_•

_•

%6.5NaClpcpl onru su

_•

_•

_•

D-Glukoz

_•

_•

_•

D-Galaktoz

"

•

•

Laktoz

"

•

"

Manrutcl

"

"

•

L-Arabinoz

"

"

"

Raüinoz

"

•

"

D Mannoz

_•

_•

_•

D - Sorbitol

"

"

_"

Eskühn

_•

_•

_•

Sakaroz

"

•

•

lnülin

"

"

"

Faruktoz

_•

_•

_•

Xy!oı _p

.

,

j'

,

l·Rharnnoz

_•

_•

"

Dutcuot

"

"

"

11

K/\V,ERG"NIŞ

Tablo3.L. garvieaesuşlarıarasındakilanotipikfarklı l ık lar

FenotipikÖzellik ATCC 1495 6 NCDO2155

O·Galakto z + laktoz + Mannitot Raftino z + Sakarez + L-Bhamncz + •ST:Sırai n: Suş Sah aSuşları(ST1-30 ) + + +

Tablo4.L. garvieaesuşlarınınAPı20Sıreptesukullanarakbelirlen enfenetipik özellikle r.

Sonuç

ATCC491 56 NCDO2155 Sahasuşları(ST 1-30 )

+. + + + + + + + + + Test Voges Prcscauor Hippuraı hıdrolizi Eskuli n pyrolanlamidaz a-Galaktcsi da z a-Gtukurenldaz a-Galaktosidaz PAL LAP Arjinindihidrolaı Riboz Arabinoz Mannitol Sorb ı lol Lekıoz Trchaloz Inuhn Rallinoz

AMD

GLYG a-nemollz + + + + + + + + + + + + + + + +

PAL Alkalin Fostöta zlA P:Lösfnarila mid az,AMD:Amidon,GL YG:Glikojen

•ST:Strain:Suş

K(ıll )'a llii1ı.:c s iı uh'Itulunun(; ;ikk u~u ilı,\Iu hulı ~ı...

Tablo 5.APı 20Streptestirün4saatinkGbasy ondan sonradeğerlendiri lmesi.

Tost kiti API20 strcp ve.c:Low Discrirninaticn Profile: 71431 11 ı.ecrccccccsıecııste cıis

E

ntoroeoecus

t

ooc

e ti

s

En

le

roeoecus m

ecium

E

nte roeoceu

s

duran

s

a-Gak a-Galacto stdase

Sorbi tol: %92,Lak toı: %9 2 a-Gal:%90,Lakloı: %84

a-Gal:%76,Laktoz:%84,M.:ınnoz: %2

%id=66.4 %id=29.1 %id=3. 7 %id=0.9 T=0 .S4 T=0.6 S T=0.6S

T=O.SO

Tablo

6.

APı20

Strep

testinin 24saatinkübasyondan sonra değ e rl end irilmes i.

Testkıu APı20 strcp V6.0 :Good Diserim ination Profile: 6143111

Lsctococcus tecıis

l

aet

is

Entercc cccus ıescsss

YP:Vog es Proscauer

YP:%90

YP: %99Sorbitol: %92 Lnktoz:%92

%id=90

%id=6.6

T=0 .69 T=0.37

(

Tablo

5)

; 24 saat

inkübasy

o

ndan sonra d

a

"1090

oranında

L.

l

aelis

ıecue

ve

%

6.6

oranında

da

E.

fe-ec

ens

benzediği

(Tablo 6)

tespi

t

ed

ildi.

APı

2

0

Strep testi son

uc

und

a

L.

garviea a

ATC

C

4

9

1

56;

5143010

,

L.

garvieae

N

CDO

21

55

;

5

14

3

15

0

ve L.

garv

ie ae

saha

suşları

da

7

14

3

11

1

kodl

u pr

ofili

g

ös

ter

di.

13

P

ZR

Çalışmad a,

t

oplam 32 ade

t

L.

garvieae

s

u-şu nu n

(S

T 1-3

0,

AT

CC

49

1

56

ve NCDO 2

1

55),

L.

garvieae'nın

1

65

r

A

N

A (E

MBL

giriş

no X542

62)

gen

b

ö

lgesine

yönelik

se

çilen

p

t.ü-

t

(S'

CA-T

AACAATGAGAATCGC

·3

'

ve

p

LG

·2

(

S

'·

GC

AC

CC

TCGC

GGG

TIG

-3')

primer

leri

ile

ılelkin

ve a

rk

(

1998)

bildird iğ i

y

ö

nteme

g

ö

r

e

yapılan

PZR

son

uc

unda

t

üm

suşlar

apor

ez

jel

elektr

o

t

cre

z

inde

M

R ım 1L.

9

Ni

'(lOlIO ı.­ loı.d

cal-01101

ATCC49156, • COO 21SS. 1-30 saha suşt rı'nın PZR li P sifikbantlarınıngörünülenmesi

1

500 bp

1

100

b

p

5

00

b

p

1500 b

p

1100 b

500 bp

M:M rk r 100 p (1 00bp, Fromega), A:L.

g

arvieae

ATCC49156,N:L.9 rvi ae NCOO 2155,NK:NegatifKontrol

Konyalliil ı: ı'ı;i ıı drlIuhmlılıC;ükkuŞIl~1Ahılıııh~ı

..

.

Tartışma

ve So

n uç

L

aktokokkozis

d

ünyada

tatlı

s

u

balık

ye·

tişliriciliOinin

ö

nemli bi

r

s

onmudur

(

Eldar

v

e

a

rk

19

99.

Vela ve ark 2000. E

yng or

ve ark

2

00

4.

M

atta

v

e

a

rk

200

4

.

T

o

ranz

o

ve

ark

2

005 )

.

La

k·

t

okokkozis in kü

ltürü

yapılan gökkuşağı alabahğı.

k

edi

balıO ı,

ayu

,

yılan balıOı, uıapıa.

yeno

wtau

.

s

azan ve

ka

rides ç

iftliklerinde ö

nemli

kayıplara

se

bep

o

lduOu

bildinlmiştir

(Zl

o

tkin

ve ark 1998,

Austın

v

e

Ausun

1999

,

A

li

m ve ark 2001, Chen ve

ark 2

00

1,

D

iler

v

e

ark 2

002.

Cheng ve ark 2003.

Rav

elo

ve ark

2003)

.

Ve

la v

e ar

k. (

2000),

farklı

ü

lke

ve

balık

t

ür-lerinde

n

i

zole

e

lli

kleri

L

garvieae'nın

1

3

b

fyotipinin

olduO

unu b

ildirirken

Eldar ve ark

.

(

1999

),

3

b

i

-yonpmin

ol

duQunu ve en

_yaygın

bfyot

ipinin

Ispanya

b

iyotip 3

olduğunu bildirmişlerdir.ça{ıırgan

(

2004

),

T

ürkiye'den i

zole ed

ilen

L. garvieae izotatlannın bı·

yo

hp 3

ol

duOunu

bildirmiştir.

Bu

çalışmada

L.

garvieae

saha

suşlarının

hepsi

Gram po

z

itif

2·10 k

ok

z

inciri

içeren. % 5

k

oyu n

kan

h

aqarda u

-hemontik

OzelliO

in

e

sah

ip

i

ken

o

ksidaz, ka

talaz.

HıS

üret

imi, i

ndol lesti ve ba

-reket

t

estleri

neqant

o

larak

saptandı.

D-

galaktoz,

ta

ktoz.

mannüoı.

r

all

i

n

o

z

.

sakka

r

oz

ve

Lrtıamnoz

tesrıen

y

Onünd en

ref

erans

suşlarla

kar

-şı laştırıldıklan

zaman

%

50

oranında

L.

garvieae

AT

CC 49156

'ya %

33.

3

oranında

da

L.

garvieae

N

CDO 2

155

i

le

Ortüşdükleri gözlenmiştir.

B

avelo ve ark. (200

1)

ve Chang ve ark

.

(

2002)

yaptıkları çalışmalarda

L.

garvieae'nın

i

span ya

suş­

la rının

s

sss'smm.

Tayvan

suşlarının

ise %2

0

'sini

n

ta

ktozdan

a

si

t

oluşturduklarını, çagırgan

(2004)

T

ü

rk

i

ye

'

den iz

ole

elliklerl 20

ad

et

L.

garvieae

su·

şunun

8

t

anesinin

(%

4

0)

l

akt o

zdan

a

sit

oluş­

turduğunu bildi rmişdir.

Bu

çalışmada

Ise

kullanılan

saha

lzctatlanrun tamamının

(30

a

det)

taktozdan

a

si

t

oluşturduOu saptanmıştır.

Bu

çal ışmadaki

t

ü

m

saha

suşları hippural'ı nıo­

r

o

lize ede

rken E

ldar ve a

rk

.

(

1999),

yaptı~ı

ça

-lışmada ıtalya, Avusıurya

ve

J

apon i

zolattannm

hippura

n

h

idrolize

etmediğini bildirmişlerdir.

B

enzer

şekilde

bu

çalışmada kullanılan

r

efe

r

ans

suşlarında hipputatı

h

idrolize

edemed

iOi

saptanmıştı r.

çalışmamızdaki

L.

garvieae'nın

sa

ha

t

a

e-latla rınınAPı

p

rOfilleri.

L.

garvieae

ATC

C

4

9156

il

e

%

8

5.7

oranında,

L

garvieae

N

CDO 2

155

il

e

%

76

.

2

oranında örtüşmektedir.

A

e

l erans

suşlar

ke

nd

i

aralarındakarşrlaştmldıklan

zaman

is

e

%

90

.5

or

a-nında

t

es

t

sonuçlarını nOr1ÜŞıüğü saptanmıştır.

15

Bu

çalışmadaki

L.

garvieae

saha

t

z

otattan.

t

av

-şandan hazı rlanan

k

apsül po

zitif

L.garvieae

A

TCC

4

9

15

6 ve

N

CDO 2

155

antiserumları

il

e lam

a9-lü

linasyon t

est

i

nde

pozttü

s

on

uç

ver

d

i.

Ayrıca

saha

suşları

k

endi aralannda

m

i

krobiyolo

j

ik ve

APı

20

S

trep

t

estlerinde

t

ek bir pr

olil

g

österirken

refera

ns

suşlarla farklılıklar

g

österdi.

Sonuç olara

k:

1

.

K

onya ili

ve çevre

sindeki

çütüxle

rde

ö

zelli kle

ya

z

aylarında

'

pop

eye

'

sendr

om u ile

se

yreden

Streptokokkozis nastauğmm

etken

inin

L.

garvieae

ve kapsü

liD

olduğu.

2

.

Suşlarm Fenotıpik

ö

zelli kleri

bakımından

ho-moj

en

olduğu,

3

.

Saha

suşlarının

fenotip

ik ö

zellikleri

ile

re-fer

ans

suşların

leno

l

ipik ö

zellikleri

arasında

f

ark·

ıllıkların

ol

duQu ve

APı

20 Strep test

i son

ucunda

L.

garviea e

ATCC

4

9156

'

nm

51

430 10

,

L

garvieae

NCDO

2155

'in

5

143150 v

e

L.

garvieae

saha

suş­

tann

da 71

431 11

kodlu

pr

of

ili

gös

terd

iQi.

4.

L.

garvieae'nın APı

20 Strep

i

le

id

en·

hl

ikasy

o

nda

%66.

4

oranında

L.

laetis

subsp

factis,

"1029

.

1

oranında

E

.

reece

ee.

%3.

7

oranında

E

te

-ecium

ve

%

0,9

oranı nda

da

Eo

durans

o

larak

l

oen-li

f

iye

ed

ildiOr

ve

identılıkasyonda bunların

g

ö

z

ö

nü

n-de

bulundurulması

gerek

t

rQi,

5

.

Saha

suşları arasındaki polimcrtizmin

g

ös-te

ri

l

mesinda

APı

2

0

S

trep

ve klas

ik

m

ik

robiyol

ojik

testterin

l

ek

başlarına

yeterli

olmadı!)ı,

ancak

RAPe ·PZR

ve

seS· PAG E

g

r

bi

daha hassas

mo

-le

küle r

ıeknikler

ile

suşlar arasındaki

oc

nmornz

m

t

espit

edilebileceği düşünütmektedtr .

Kay

nakla r

Af

onso

A

.

S

Uva J

er

An

d Gomes

S (

2003)

Lactococcus

çsrv

teao

troutinleCı ions

in Po

rtugal: A n

ew

c

h

allenge

o

n

l

is

h

vaee

inology.

tnsutct e ter

M

olecule

r

and

G

e

li B

iology

.

IBM

G

N

ews

l

eb03

;

"

10.

Al

im S

R

.

Anvnr

H

ossain

M

, Gh

owdhury

EK a

nd

Ku

suda

R

(2001) G

l

a

nt

igen:

a celf-surtaceimm unoproıective

96

k

Oa

gly

copro

te

in

l

rom

t

he v

irulontlish

p

athagen

E

n·

terococcus seriolickJa, its

purilication

and

cne-rac

tenzau

on.

Adv App

l M

icr

o

b

io

l 32

.

357-3

67.

A

ustin

B

and Aust

in

D

A

(

1

999) Ba

c

tertat

Iısh

p

athogens

d

ise

ase

in

l

armed and w

ild

usrı,

Seeond

E

dition E

lhs

Ncr-woodltd.

L

ondon

.

Ba

chrach G

,

Zlolk

in

A.

Hurvi

tz A

, Evans O and Eldar A

(2001) Recovery o

f

Strep:ococcus iniae

l

rom diseased

fiSh

pr

eviously

vaccinated w

ilh

a

Streptococcus

v

ecene.

App

l

En

viron

Mictobiol 67

(8)

:

37

56-3758

.

K,W .ERGA:-':IŞ

cberactenzauon and iconüncanon of aerobic and la -cultatrvely anaerebiç Bram-pczitive cocci. Clin Microbio! Rev.11(2):318·340.

Belton D (2002) lmport risk assossmont: juvonile yo l-lcwtail kinglish (se -rcıa la!ancJi) trcm spencer gulf a qu-eculture,SoulhAustrana.NIWAcüeotAepo rt 1· 58. Betzl D, Ludwing W and Schleiter KH (1990) ld

en-nncatıcn ol Loetoeoce;and Enunococcibyeolony hybri· cucucnwilh 23S rONA·ıa rgeıedoligonucleolide Probes. Appl Environ Microbiol, 56 (9): 2927-2929.

BlaiouaG. Pcpc O.Maurie tlc G,ViIIaniF,Andolli Rand

Moscheıli G (2002) 16S-23S rDNA inle rgenic spacer r e-gion polymorphism of ıecrccccccs

garvie

ae.

Lae·

tococeustettiratecıisand cccrcc cccc s

tsctis

as

r

evearee

by PCR and nucteotido sequcnce analysis. Appl

Mc

-rcbio l25,52Q.527.

Chang PH, Lin CM ve Plarre (2002) tactococcus gar· vleae Intection ol eullured rainbow trout.Oneorhynehus

mykiss. in taiwan and associated biophyslcal cha

-ractenstcs

and histopalhology. Bull. Eur. Ass.Fish Pal

-bol. 22(5):319·327.

Chen SC, Un VD, Liaw LLand Wang PC (200 1) ı.ac­

tococcus garvioae

mrecuc

n

inıbegaintlreshwat erprawn Macrobra nc/ı ium rosenbergii conli rmc d by polymcrase ehainreacucnand16SrDNA scquencing. DisAqual Org

45:45·52.

Cheng W. Juang FM,LiJT,Un MC. Uu CH and

cn

en

JC (2003) The immune

re

spo rise

ol giant freshwat er prnwn Maerobrachium rosenbergii and us susceptibility to z.ectccccccsgarvieaein re talien to moult slage.Aq

u-a

cuuure

218, 33·45.

Çagırgan H (2004) Biotyping ol Laetococcus garvioa6 tsc tate d from Turkey. EU Journalof Fısb e ne sand A

qu-ete

scıences21(3-4):267-269.

öner Ö, Altun S. Adiloglu AK, Kubilay A and Isıklı B

(2002) First occınrence ofşırooıococcostsalleclin g

far-med rainbowtroutin TUrkey. BullEur FishPathol 22: 2

1-26.

Eldar A, Ghillıno C, Asanla L,Bozzella Eand Goria M (1996) Enlerococcus serioficida is a junior synonym ol

Laclococeus garvicae, a eausalive agent ol soptieemia and meningooneephalıtis in lish. CurrMicrobiol 32:85'

B6.

Eldar A, Gloria M, Ghiltino e. Zlotkin A. Bereovier H

(1999) Bıodive rsily ol Laelococcu5 garvieao strains iso· lalod Irom lish in Europe, Asia. andAusl ralia. AppL. En -viron. Microbio!.65:1005- 1008.

Ellioll JA and Facklam RA (1996) Antimicrobial sus· ecplibililies ol LEJc/ococcus /actis and /acloeoccus gM'

v/eaeand aproposed method To dıscriminale between

Them. J Clin Microbio!.34 (5):1296·1298.

EnisAE (1988) Fish vaccina lion. Aeadomic Press. Lon -don.

16

Eyngor M. Zlol kin A, Ghillino C, Prearo G, Douet DG. ehilmonczykS and Eldolr A (2004 ) elonalily and djvers ity

ol Ihe lish patheçen Lactocoef.:us garvieae in Me·

diterranean Countries. Appl Envırcn Microbiol 70 (9):

5132·5137

Fackla m R and Ellictt JA (1995) ıcıe nuücaucn. cıas­ sınceücn. and clinical retev ence ol ca teıase-neçanve.

çrern-pcaıu ve cccc. exeluding the sırepıoccccıand En

-ıotooocci. Clin MicrobiolBeviews.6(4): 479-495.

set

er

JJ. Aatzan KA. SharpSE and Saiz E(1998)

Lee-tococcus garvieae endocarditis:report ol

a case

and re -vicw of theliterature.Diagn Microbiollnlect

Dis

.

32: 12 7·

130.

Fihman

V

.

Raskine L.Barrou Z, Killcl e. Riahi J.Berçot B and Sanson-Le Pors MJ (2005)Loctococcus garvioa.o

cnocceroıus: identilical ion by 16S rA NA and sodA

se-quenceanalysis.J fntect.(Arl icle inpress)

Heppel! J and Davis HL (2000) Applicatron ol ONAve

e-cine technology to aqu acultu re.Adv Drug DeüvRev.43:

29·43.

Holl JG (t997) Group 17 'Gram-Pcsıtıve Coccr ' Ber-gesy's Manual o, üete rmınanve Oaclcri ology' Ed by JG Hen 9Edilion540.Williamsand Wilkins USA.

James PA. Hardrnan SMC and Pallerson DLH (2000) Ostoomyelihs and pcssible endo caroıtıs secondary lo

Laclococcusgarvieae: a ürst case report .Postgrad Med J 76: 301-303.

Malta AI, Gibello A, casamaver A,

Bla

ncc

MM,

Do-minguez L and Femandcz·Garayzabal JF (2004) Mu!·

tiple

x

peA assay for oeıecücn ol bacteneı pathogenes

cssoctet eowilhwatm-waterStreptoeeccosisintish.Appl

EnvironMicrobicl70 (5):3183-3 187.

Ok

a

d

a

T,Minami

T,

OoyamaT. Yasuda H and

v

cst aoe

T(2000) Capsularand non-cepsereranligenloc anzation

on

t.e

crccccccs

garvieaetscratedfromyencwıaü(Serio/a

quinquera diaıa). Fisherios Serence.66(5):992-994.

Ooyama T Hirokawa Y Minam; T Yasusa H Nakai T

EndoM Ruangpan L and Yoshida T (2002) Cell-surfaee propertics o, Laclococcu s garvieaestrains and their im -munogenity in Ihe yellowıail sorio/a quinqueradiata Dis

Aqu aıOrg,51:169-177

Ravclo C.~agarinosB, Romald eJL,tom nzo AE (200 1) Conventionaf versus min iaturiı ed syslems lor Iha phe

-noıypic characle rizalion or Lactoccus garvioae strains.

Bull. Eur.Ass.Fish Pal hol.21(4) 136- 144

Ravelo C. Magorinos B. Romalde SL, Toranzo AE and JL Romalde (2003) Molecular tingerprinting ol hsh-pa~hoj e n ;c/acloeoecusgarvieaoslrains by mndom amp·

Wed polmorphic DNA Analysis. J Clin Microbiol, 41(2): 751·75 6.

RobertsonPAW, O'Dowd

co,

BUHellsC,Williams P and

Austin B (2000) Use ol Carnobacte rium sp. As a pro-biotic 'or Aı la nt ic salmon (Salmo salar L) and minbow Irout (Oneorhynehus mykiss, Walbaum). Aquacullure

K"ıı)';ıııill ltuh uı~n"IUIl IlIlGöt.ku~a ~LAı..bıd ı~ı.. ,

185

:

235-243

.

Romalde Jl, Alvarez AL. aeveıo C. Tereoac AE and Mcndez JB(2004 ) Oratrmmuntzanonusıngalginale mc

-topartiCles as a useıcı sıratcgy 'or booster veecinatm

agaınst hsh

Lae

tococco5is

Aquacullurc. Aquacuüure,

23

6

.

119-

129

.

Sneam P.H.A (1986) Seenon

12

.

Gram-Posilive Cocci.

Edby PHA Sneath ·Bergoy'sManual ol Syslema1ic Bac-tenology' (2)1070 Williams andWıl kın sUSA.

TeixerraLM,MerqulOr

Vt,

VianniMC,CarvalhoMG, Fra-calannaSE,Sıcigerwall AG.Brenner DJ and Facklam RR(1996) Phenolyptc and gonolypiccharactenzaıcnol

aıypıcal

Lacrococcus

garviedS suaıns tsoıated from

water bullalOS wıth $ubcfıntcal maslıbs and eonfinnalion

ol L garvic.:ıo

.u

n scnior subtective synonym of

En-t

erococcus

soriolicıd.ı. Inı

J

SystEvalMierobiol.

46

:

664-668.

17

ToranzoAE, Beatriz M and RomaldeJl(2005)A review

01 the main beeıenar lish diseases in manncuıture

systams.Aqu8cul1uro.(Articlein press).

veıe AI, Vazquez J, GıbelloA.bıancc MM,MorenoMA,

Ucbana P,Albenclea C,Alcala

B

.

!"'eodez

A

.

Oominguez

L and Garayzabal JFF (2000) Plıenolypic and genetıc

cneracteezeuc n ol

La

ctococcus g;JfVl(Jae

isolaıed in spain 'rom

Lac

tococcosis

ou1break.s and comparison wılh isotates olother countries and scurces.J ClinM

ic-'00101,38(10):3791·3795.

Vın.lnantharaı S (2001) Immunological methccs of dı·

sease control. Aqua tic Anima lHeall Division.Alphanna

lne.10J. 109.

Ztotkin

A,

Ek1a,

A.GhınınoandCBercovıer(1998)

Iden-liticali en ol

Lac:

ococus

gaMea~ by PCR.

J

cin Mie·