Başlık: ANKARA YÖRESİNDEN ELDE EDİLEN THEILERIA ANNULATA (Dschunkowsky and Luhs, 1904) İZOLATLARI ÜZERİNDE ARAŞTIRMALARYazar(lar):SAYIN, F.;DİNÇER, Şükran;KARAİN, Zafer;İNCİ, Abdullah;YUKARI, Bayram Ali;ÇAKMAK, Ayşe Cilt: 46 Sayı: 2.3 DOI: 10.1501/Vetfak_

I\nkdra Lnıv Vet Fak Derg

46,207-218.1999

ANKARA YÖRESİNDEN

ELDE EDİLEN THEILERIA

ANNULA TA (Dschunkowsky and Luhs, 1904) İZOLA TLARI

ÜZERİNDE ARAŞTIRMALARI

5. Theileria annulata kan stabilatları ile enfekte edilen danalar üzerinde

antikor yanıtı ve serolojik çapraz reaksiyon çalışmaları

Fahri SAYIN]

Şükraıı DİNÇER]

Zafer KARAım]

Abdullah İNCP

Bayram Ali YUKARı

4

Ayşe ÇAKMAK]

Hasaıı EREN

5

lIıvestigatioıı oll the Theileria aıınulata (DschUlıkowsky aııd Luhs, 1904) slocks

isolated arouııd Aııkara.

5. Alltibody respOlıse aııd serological eross-reactioıı studies

OIl

experimeııtally

infected calves with Theileria aııııulata

Summary:

In this study 7 susceptible Holstein calves, 2 to 3 months ol' {{Ke,

were inleeted with Tannulaw

blood stabilates obtained ji-om diseased e{{ttle in 7

dijjerent vill{{ges ol'Ankara. In addition one wll' contracted Tannulata

inl'ection in

jield ı.vas included in the experiment. Antisera were colleeted ji-om the inleeted

('({lııes and tested with Indirec.t Fluorescence Antibody Test (lFA T) jf)r wıtibodies

to sehizont und piroplasm antiKens. In the absenc'e ()l'rechallenKe oeeurrence and

du rat ion ol' (/ntibody responses were observed and reacti vity between the dijje rent

isolates ol' Tannulata

were investiKated.

The results showed that duration ol' antibody response to the theilerial

injection

W(lS

more than one year. There was seroloKical cross-reactivity

at hiKh

level titres between all the isolates ol' Tannulata.

Antibody to piroplasm antiKen

was detw;table jf)r eartier and 10nKer than antilJodie to schizont

antiKen. In

general wıtibodies

which were detactable by lFA test appeared about 2.4 week s

alier injection and continued to rise ./f)r a further 2-4 weeks. Following this, they

stabitized

and then dedined

at a variable rate. In the absence ol' reehallenge

• schizont lFA antibodies

have generally

dedined

to

J:

LO while piroplasm

lFA

antibodies

have generally

dedin ed to 1:320 by one year alier inl'eclion. The

infected calves tested were in ı..:arrierstate. Baseline titres were taken at 1:40 j()r

sehizont antigen and

J:

20for piroplasm antigen.

Key words: T amıulata, blood stabilates,

wıtibody

response,

serologieal

emss-reactions,

experimental infection.

i Bu çalışına Ankara Üniversitesi Araştırma Fonu tarafından 87 - i0.00-0

ı

no' lu proje olarak desteklenmiştir. 2. Ank.Ünjv. Veteriner Fakültesi, Protozooloji ve Entomoloji Bilim Dalı, Ankara

3 Ercıyes Univ. Veteriner Fakültesi. Parazitoloji Anabilim Dalı, Kayseri 4 I\kdenız Unıv. Burdur Veteriner Fakiiltesi. Parazitoloji Anabilim Dalı 5. Adnan Menderes iJniv. Veteriner Fakiiltesi. Parazitoloji Anabilim Dalı

F.SA YıN. Ş.DINÇER. Z.KARAER. AÇAKMAK. A.l:'>JCt. B.A.YGKARI. HER.Ei\

Özet:

Bu ç:alı,l'nwda, 2-3 aylık duyarlı 7 Hoıstein d(l/wsı, Ankara 'llLn 7 dej{i,l'l'k köyünde tropikal theileriosis'e yakalanmış

7

sığırdan alman Theilericı annulaf([ kan stabilatı ile enFekte edilmiş; ayrıca doğal enFekte (Bala-ı1GEM) bir dww da ç.a/t,l'I1wya dahil edilmiştir. EnFekte danaların herbirinden belirli Z.(l/11wıüırda tnjJülıwn antiserumlar, piroplamı ve ,çizont antijenleri kullallLlarak, Indirek Floresan Aııtikor (lFA) yiintemiyle test edilmişlerdir. B(Jylece mevcut aııtiserumlarda antikor yamtmııı varlıj{ı, Kiirüldüğü Kün ve süre Kiizlenmiş. dej{işik orijinli Theileria annulata izolatları arasındaki serolojik çapraz reaksiyonlar inceLenmi,çtil'.

Hastalığı Keçiren bütün danalarda T.annulata 'ya karşı pozitiF reaksiyon ;.;iil'ülmiiştür. Genellikle enFeksiyondan

2-4

hafia sonra danaların kanında antikor saptwınıı,çtır. Bunu izleyen

2-4

'üncü hafta ir,:inde antikol' titreleri yükselmi,ı' ve da/w sonra giderek az.almıştll'. EnFeksiyondwı yaklaşık 1 yıl sonra danalardwı alll7an kaııda şizont antijeni ile

i:

LO, piroplazm antijen

i

ile 1:320 titrede antikora rastLannuştır. Dej{işik orijinli T.annulata izolatLarı arasmda yüksek titrede serolojik ç:apraz. reaksiyon olupnu,ı.tur. Kanda piroplazm antijenine kw',l'l oluşaıı antikorlar, ,"imnt antijenine karşı oluşan antikorlara nazaran. daha erken dönemde ve daha yüksek titrede bulunmuşlardır. Şizont antijenLerine kar,"1 oLu,l'(/n antikorlar için 1:40, piropLazm antijenlerine kar,çı oluşan antikorlar için 1:20 ba'! ritre olarak kulla/1/ lmı,çtı r.

Anahtar sözcükler:

T annulata, kün stabilatlan, antikor y(//utı. semlojik ('apm? reaksiyon, deneysel enFeksiyon

Giriş

Bazı ara~tırıcılar (l ,6-9, i2) sahadan izole edilen TW1l1ulata stoklarını immunolojik açı-dan farklı hulmuşlardır. Sergent ve ark. (I 2), homolog hir su~a kar~ı oluşan premünisyonun hctcrolog bir suşa karşı oluşan premünisyondan daha kuvvetli olduğunu bildirmişler, Pipano ve Hadani (6), Raf yi ve ark. (8) bağışık bir sığırı hetcrolog hir suşla eprüve ettikten sonra hay-vanda zayıf hir reaksiyonun görüldüğünü be-lirtmişlerdir. Adler ve Ellenbogen (1) ilc Ser-gcnt ve ark. (12) ise, Cezayir'den izole edilen hir suş ilc İsrail'den izole edilen bir suşun bir-hirine karşı koruyucu hir etki oluş-tıırınadıklarını saptamışlardır.Buna karşılık Ra-sıılov (Y), Özbekistan ve Azerbaycan'dan izole edilen TWll1uLata suşlarının birhirine karşı ba-ğı~ıklık olu~turduklarını tespİt etmiştİr. Pipano ve ark. (7) hu durumun çqitli bölgelerden izole edilmiş olan T.annulata stoklarının antijenik yapılarının farklı olmasından kaynaklandığını ileri slirmü~tür. Aynı araştırıcılara (7) göre, kül-ıivasyon ve pasajlarla atenüye edilmiş

T.anl1uLai{l Ankara suşu ilc a~ı1anan duyarlı

da-nalar, patojen Tannulata İsrail suşumll1 kene stabilatı ile eprüve edildikleri zaman has-talanmışlardır. Danaların ateşi yükselmiş, ka-raciğerde parazitin ~izontları, perifer kanda pi-roplazmik ~ekilleri bulunmuştur. Bunlara karşılık Subramanian ve ark. (14), Hindistan'ın deği~ik bölgelerinden izole edilen Tal1nu/uta

stokları arasında yaptıkları çapraz hağı~ıklık de-neyieri sonunda su~ farklılığı görmediklerini bildirmişlerdir. Pipano ve ark. (7) göre, As-karov, Dağıstan, Özbekistan ve Azerhaycan'clan izole edilen Tmmuluta stoklarının antijcnik ha-kımdan birbirine benzediğini, bu dunıımın İn-direk Floresan Antikor Testi (IFAT) ile sap-tandığını belirtmiştir.

Bu araştırma Ankara'nın değişik köy-lerinde tropikal theileriosis'e yakalanmı~ sı-ğırlardan elde edilen TannuLuf(l kan stabilatları ile enfekte edilen danalardan ve doğal enfekte 1 danadan (Bala- TİGEM) hazırlanan ~ilOnı ve piroplazm antijenleri ilc bu danalardan deği~ik zamanlarda alınan antiserumlar arasındaki re-aksiyonlar, seropozitif olgularda giiriilcn an-tikor titreleri ve bu olgularda seropo/itit1ik sii-relerini incelemek amacıyla yapılmıştır.

2()ı)

Rd.IO

(+);

Bu çalışmanın ilk böIi.imünde helirtildiği gibi yapılmıştır (I O).

Rd.144890

Tannuüaa

Tannuüaa

(-),

Hannover.

a) Piroplazm antijeni:

Theileria annulata

ile inoküle edilen deney danalarından, paraziteminin o/cTye çıktığı dö-nemde, 20em3 heparinli kan alınmış, hu kan 3

misli 4°C de steril PBS ile sulandırılmış ve 2100 devirle, +4°C de,

Lo

dakika santrifüj edil-miştir. Tüpte yüzeye çıkan sıvı pipetle çekilip atılmış, dipte toplanan eritrositler üzerine, erit-rosit seviyesini 3 misli, +4°C'de PBS ilave edil-miştir. Pipetlenerek suspansiyon haline getirilen

7) IFAT için antijen hazırlanması Çak-mak' a (2) göre yapılmıştır.

6) Teste kullanılan pozitif ve negatif kont-rol serumları:

Bu araştırmanın 1'inci makalesinde bil-dirildiği şekilde uygulanmıştır (I O).

Ankara'nın Gülseren, Emirler, Baleıkhisar, Eryaman (2 kan stabilatı, Eryaman- i ve Er-yaman-2) ve Hıdırşıh köylerinde tropikal ıhc-ileriosis'e yakalanmış sığırlardan alınan

Tannulata

kan stabilatları ilc enfekte edilen sı-rasıyla 87-75, 88- ıo 1, 88- 102, 88- 103, 88- 104, 86-

Lo

1, 86-1 i5 numaralı 7 dana ile doğal en-fekte 87-77 (Bala -TlGEM) numaralı danadan enfeksiyonu izleyen ilk 2 ayda haftada hi1',

sonra daha uzun aralarla, heparinsiz steril tüp-lere (Vaeutainer, Brand SST tuhes, Becton Dic-kinson, Lot/chB 6Y086) alınan yaklaşık 9.Sml kan, 2000-2500 devirde iO dakika santrifUj edi-lerek çıkan antiserumlar i.5mI'lik mikrotüplere (Karteıı Part NO.000298-00 Miero T tuhes Neuı., FSA. Tul-645-0306, Supplier code 46(200) konmuş ve lFA (İndirek Floresan An-tikor Testi) testinde kuııanılıneaya kadar -20°C de saklanmıştır.

4) Enfekte danalardan kan alınması ve se-rumun ayrılması:

5) Theileria annulata

kan stahilatı ile en-fekte edilen danalarda tropikal theileriosis'in iz-lenmesi:

.\i\iKAR/\ YÖRESll\DEN ELDE EDILEl\ THE1LLR1A ANNULATA (Dschunkowsky and Luhs. 1c)()4) IZOLATLARI ÜZERINDE ARAŞTIRMALAR

Materyal ve Metot

Alkali kısım üzerine pH= 7.2 oluncaya kadar asit kısım ilave edildi.

£I) fosfat Builer Salin (PBS) Potasyumsuz:

Alkali kısım 17.44 g NaCl 7.16 g NazHP04 X ız HzO 24.60 gr 2000 ml distiIe suda eritildi. Asit kısım 8.72 g NaCl 1.38 g NaH2P04 X 1-120 10.10 gr 1000 ml distiIe suda eritildi. 2) Deney hayvanları:

Bu çalışmada

TW1I7ulata'ya

duyarlı, Hols-tcin ırkı, 2-3 aylık 8 erkek dana kuııanılmıştır.

i) Kullanılan Malzemeler:

3) İnokiiIasyondan önce danaların mu-£Iyenesi ve

Theileria annulata

kan stabilatının elele edilmesi:

h) Evans Blue: Merck, caL. no. 3 169 c) Gliserin: Merck, caL. no. 4095 d) Tech Pen Marker: NeoIab 2-5050. c) Teeh Pen lnk: NeoIab 2-5051

1') PS mikroplattle U-Form 96K: Greiner 6S010]

gl Osram: HBO 50W/ae super pressure Mcreury lamp: i] 9003 0004

h) Standarttips ] O1- iOOOfll Eppendorf: O()30 OiS. 002

i) Standarttips 0.5-IOfll Eppendorf: 0030 00

ı

168

k) Standartlips 1-IOOfll Eppendorf: 0030

003 004

i) Eppendorf: 4710 38003 M, 100-1 OOOfll pipel. m) Eppendorf: 4710 28330 M, 1O-100fll pipel. n) Eppendorf: 4710 51249 M, O.S-IOfll pipel.

o) Bround, Transferpette-12, SO-200fll; cal.:"Jo.04 i74 i26.

211) F.SAYIN, Ş.DINÇER, Z.KARAER, A.ÇAKMAK, A.INCI, B.A.YUKARI. II.ERE~

eritrositler 2100 devirle +4°C'de 10 dakika sant-rifüj edilmiştir. Tüpte yüzeye çıkan sıvı bir pi-petle çekilerek atılmış ve dipteki eritrosit tor-tusu, bir önceki gibi, PBS ile sulandırılıp suspansiyon haline getirilip santrifüj edilmiştir. Yıkaımı işlemi 3-5 defa tekrarlanmıştır. Antijen preparatındaki parazit yoğunluğunu tespit etmek amacıyle yıkanmış eritrositten az bir kısmı. i:2- i:4096'ya kadar PBS ile su-landınlmıştır. Bu şekilde seri halde su-landırılmı~ olan eritrosit suspansiyonlarından, önceden aseton- alkol karışımı ilc temizlenmiş bir lam üzerine, özel renkli bir kalemle çizilmiş, 2 sıralı Wer dairenin her birine 5111kadar dam-latılmıştır. Daha sonra lam havada kurutulmuş, iOO°C'de etüvde i5 dakika tespit edilmiş ve Gi-eııısa boyası ile boyandıktan (~.' 5 Giemsa so-Iıisyonu ile 30 dakika) sonra, bir mikroskop sa-hasında 20 parazitin görülmesi esas alınarak sulandırma basamağı saptanmıştır. Tespit edil-miş olan sulandırma basamağı dilüsyonunda yı-kanmış eritrosit üzerine, PBS ilave edilmiştir. Bundan sonra yukarda belirtilen çizilmiş hazır lamlara elde edilen yıkanmış ve dilüye edilmiş eritrositlerden Sııl damlatılmış, 37°C'lik etHvde hir gece bekletilmiştir. Kuruyan antijen pre-paratları, 5'er adedi bir arada olmak üzere, sel-pak kağıdına sarılmış, üzeri alüminyum folye ilc kapatıldıktan sonra bir kutu içine konarak -700C'lik derin donduruClıda saklanmıştır.

b) Şizont antijeni:

Şizont antijeni, bu çalışmanın 2'inci bö-lümünde (I i) ayrıntılı olarak açıklanan yön-temler kullanılarak, T.annu/ata ile enfekte deney danasından elde edilmiş enfekte kandan yapılan hücre kültHrünün seri olarak yapılan Winci ve i i'inci pasajlarından hazırlanmıştır. Bu pasajlardan elde edilen hücre süspansiyon u

ı

000 (levil'de, iSAC de, S dakika santrifüj edil-Illi~tir. Tüpte yüzeye çıkan sıvı steril bir pipetle

çekilerek atılmış, dipteki hücre tortusunun üze-rine +4°C de, steril PBS ilave edilmiş, kanşım pipetlcnerck süspansiyon haline getirilmiştir. Süspanse hücre 1500 devirde iSOC de S dakika santrifüj edilmiş, tüpte yüzeye çıkan sıvı bir pi-petle çekilerek atılmıştır. Bu yıkama işlemi 3 dda tekrarlanmıştır. Sulandırma basamağını tesbit amacıyla yıkanmış hücre tortusu

1:5-1:640'a kadar +4cC de steril PBS ile su-landırılıp süspansiyon haline getirilmiştir. Böyle seri halde sulandırılmış hücre süs-pansiyonlarının herbirinden, piroplazm anlijcni hazırlanmasında bildirilen işlemler aynen uy-gulanmış,önceden aseton-alkol karışımı ile te-mizlenmiş bir lamın üzerine, özel kaleınle çi-zilmiş iki sıralı 8'er dairenin her birine, 5!JI kadar damlatılmıştır. Lam havada kurutulmuş,

100cC de eliivde tesbit edilmiş. Giemsa boyası ile boyanmıştır (%5 Giemsa solusyonu ilc 30 dakika). Bir mikroskop sahasında 20 parazitin görülmesi esas alınarak sulandırma basamağı saptanmıştır. Tespit edilmiş olan sulandırma ba-samağı dilüsyonunda yıkanmış hücre üzerine PBS ilave edilmiştir. B undan sonra yukarıda belirtilen çizilmiş hazır lamlardaki dairelere, elde edilen yıkanmış ve dilüye edilmiş hüc-relerden 5!Jl kadar damlatılmış,

noc

lik etlivde bir gece bekletilmİş, kuruyan şizont antijen pre-paratları selpak kağıdına sarılarak, 5'i hir arada, alüminyum folye ilc sarılmıştır. Daha sonra bunlar bir kutu içine konarak -70°C deki derİn dondurucuda saklanmıştır.

8) ındirek Floresan Antikor Testi 'nin uy-gulanması:

a) Önceden hazırlanmış antijen prcparatlan derin dondurucudan (-70°C) çıkarılarak, nem çekiei(CaCIı v.b.) kapalı bir kaba konmuş ve 2 saat tutulmuştur.

b) ışlenecek olan serumlar bir gün önceden derin dondurucudan (-20°C) çıkarı !ıp buz-dolabına (+4 OC) konmuştur.

c) Bu serumlar usulüne uygun şekilde mik-rotiter plate'de sulandırılmıştır( i: i O, i :20, 1:40,

1:80,1:160,1:320,1:640,1:1280).

d) Nem çekici ortamda 2 saat bekleyen an-tijen preparatları numaralandırılarak nemli or-tama konduktan sonra, üzerlerine sulandırılmış serumlar damlatılmıştır (Nemli ortam, kapaklı bir küvetin içine süzgeç kağıdı serilerek, üze-rine distile su dökülmek suretiyle ha-zırlanmıştır).

e) Nemli ortam, klivetin kapağı ka-patılarak, etüvde (37cC) tutulmuştur.

211

Aynı danadan(87 -75 numaralı), en-feksiyonu izleyen ITinci günde alınan an-tiserum, Tal1l1ula{(l- Emirler kan stabilatı ilc enfekte 88-103 numaralı danadan hazırlanan heterolog şizont antijeni ve heterolog piroplazm antijeni ile teste tabi tutulduğu zaman ise kıs-men yüksek titI'di (sırasiyle 1:640 ve 1:2560) reaksiyon vermiştir. Onycdinci günden itibaren antiserumda mevcut antikor titrelerinde, her iki heterolog antijenle de, tedrici bir yükselme tes-pit cdilmiştir. Enfeksiyonun SO'inci gününde antikor titrelerinin, şizont antijeni ilc

ı

:5 i20'ye, piroplazm antijeni ile i: 10240'a çıktığı sap-tanmıştır. Bundan sonra tekrar dü~üşe gcçen an-tikor titresi, enfeksiyondan 347 gün sonra

Şl-zont antijeni ile

ı

:5, piroplazm antijeni ile 1:

ı

280 olarak bulunmuştur ..

Theileria al1l1u{a(a- Gülseren kan stabilatı ile enfekte 87-75 numaralı danadan, en-feksiyonu izleyen ITinci günde alınan an-tiserum, T.all/ıulaw (Bala-TİGEM) ile doğal enfekte 87-77 numaralı danadan hazırlanan he-terolog şizont antijeni ve heterolog piroplazm antijeni ile test edildiğinde, kısmen düşük tit-red c (sırasiyle 1:320- i:640) reaksiyonlar ver-miştir. Her iki heterolog antijenle test edilen hu örnekteki antikor titresi, birinci örnekte olduğu gibi, ITinci günden sonra giderek yükselmiş, 50'inci günde zirveye çıkmış (şizont antijeni ile

1: 1280; piroplazm antijeni ile 1:25(0), daha sonra tedricen azalmıştır. Enfeksiyondan 347 gün sonra antiserumdaki antikor titresi, şizont antijcni ile 1: 10, piroplazm ~ntijeni ile i:80 ola-rak saptanmıştır.

Tablo 1'de görüldüğü gibi TW7/1I1{o{o-

Gül-seren kan stabilatı ile enfekte 87-75 numaralı danadan, enfeksiyonu izleyen, 1Tinci günde alı-nan antiserum, aynı danadan hazırlanan ho-molog şizont antijeni ve homolog piroplazm an-tijeni ile yüksek titrede (sırasiyle

i:

1280-1:2560) reaksiyonlar vermiştir. Ondan sonra an-tiserumda mevcut antikor titresi giderek yük-selmiş, 50'inci günde şizont ve piroplazm an-tijenlerinin her ikisiyle de i: i0240 olarak saptanmıştır. Daha sonra antikor titresi tedricen düşmeye başlamış, enfeksiyondan 3 i 1 gün sonra, şizont antijeni ile 1: 10, piroplazm an-tijeni ile 1:320 olarak tespit edilmiştir.

Haresan mikroskopta (Neofluar 40'lık

ob-Bulgular

9) Konjugatın Sulandırılması:

Ankara'nın Gülseren, Balçıkhisar, Emirler, Eryaman ve Hıdırşıh köylerinde tropikal the-ileriosis'c yakalanmış sığırlardan alınan

10/1/11110{0 kan stabilatları kullanılarak enfekte

edilen danaların 2'si (87-75, , 88-1(3) ve TO/1/1ula{(l (Bala-TİGEM) ile doğalolarak en-fekte 87-77 numaralı danadan hazırlanan şizont ve piroplazm antijenleri ilc enfekte edilen da-naların 2'sinden (88- iOi, 88-102) hazırlanan yalnız piroplazm antijeni, değişik zamanlarda 3 dana'dan (87-75, 88-102 ve 88-104) elde edilen antiserumlarla reaksiyana sokulmuş ve aşağıda helirtilen sonuçlar ortaya çıkmıştır.

İndirek f10resan antikor testinde kul-lanılacak konjugat (Sigma antibovine rabbit IgG, Cat No. F-75(9) iyi floresan titresi tespit edildikten sonra 10 ve 20IJl'Iik porsiyonlara ay-rılarak -20°e'ye kaldırılmıştır. Konjugat su-landu'ma sıvısı olarak i kısım Evans blue, 3 kısım PBS kullanılmıştır. Şizont antijeni ve pi-roplazm antijeni için 1:32 nispetinde su-tandırmanın, en iyi Horesan veren titre olduğu saptanmıştır. Yapılan indirek Daresan antikor testinde (IFAT) yukarda belirtilen oranda su-landırılan konjugat kullanılmıştır.

i) Kurutulan preparatlar üzerine gliserinli hullcr damlatılarak lamel kapatıldıktan sonra kapaklı kutularına konmuştur.

h) Madde 6'daki yıkama ve kurutma iş-lemleri tekrarlanmıştır.

i) Karanlık odada preparatlara bakılmıştır jcktif kullanılmıştır).

g) Kurutulan preparatlar yeniden küvet i,<indeki nemli ortama hırakılmış ve üzerlerine sulandırılmış konjugat damlatılmıştır. Sonra 37°C'de 30 dakika tutulmuştur.

ANKARAYÖRESINDEN ELDE EDILEN THt1UR1A ANNU/ATA (Dschunkowsky and Luhs. 19(4)

IZOLATLARı ÜZERINDE ARAŞTIRMALAR

n

Bu süre sonunda preparatlar PBS ile bir defa elde yıkanmış, her biri 5'er dakika olmak üzere 2 defa da magnetik karıştıneıda yı-kanmıştır. Bunu takiben distile suda 2-3 dakika yıkanarak fön makinesi ile kurutulmuştur.

212 FSAYIN, Ş.DINÇER, Z.KARAER. A.ÇAKMAK. A.INCI. BAYCKARI. H.EREN

Tahlo i Ankara'nın de~i~ik köylerinden elde edilen Theilaicı annulata izolatlarına ait ~izont ye piroplazın antijenleri \e

T(//l/Iu/ıı/ıı- Gülseren anti- senı mu kullanılarak. IFATile yapılan çapraz serolojik reaksıyon testlerımn sonuçLm. Table I. The results of serological cross reaction tests performed between the antigens of T.annu/ata ısolates froın dlllereJ1l

Yillages of Ankara and the antisera against Tamıuluta Gülseren stoek.

Anıı-seruın

87-75 (GliIseren) 87-77* (Bala-TIGE\1) 88-103 (Eınırler)

Günler SAg. P.Ag. S.Ag P.Ag S.Ag I)Ag

O 17 i: 1280 1:2560 1320

ı

:640 1:640 12560 28 1:5120 1:5120 1:640 i: 1280 12560 LS 120 35 1:5120

ı

:5120 1:640 i: 1280 1:5120 i 111240 42 15120 15120 1:640 i: 1280 15120 i .1ll240 50 i: 10240 i: ill240 i: i 280 12560 1:5120 110240 6S 1:1ll240 1:5120 12560 I: 1280 12560 i 5120 115 1:5120 1:2560 i: 1280 1640 12560 15120 176 1:640 1:2560 1:640 1640 1:320

ı

.S120 216 1:320 1:2560 1:640 1:640 1'160 1.5120 236 i: 160 12560 1320 1:640 i:160 5120 270 1160 i: 1280 1:320 1:640 1:160 : 1280 311 120

ı

:320 1:20 1320 1:20 12S0 325 1.\0 1:320 i :

ı

O 1:320 i :iO 1280 347 1:10 1:320

ı:

i O i: 180 1:5 1280

S.ı\g .. Şi:wnt antijen. P.Ag.: Piroplazın antijen, -: Negatif reaksiyon. : Doğalolarak enfekte oldu. IFAT: Indırek floresaıı AJ1likor Testi S.Ag.: Sehizoııt antigen, P.Ag.: Piroplasın antigens. -: Negatiye reactıon. "':It was inl'ceıec! ın fıeld. i FA Tındıreeı fluoreseeJ1l uııtihody test.

Tıhlo 2 Ankara'nın değışik köylerinden elde edilen Thl'ilaia umıu/ata izolatlarına ait ~il.Ont ye piroplazm antiJenleri \'e

Tııllll/./lııııı- Balçıkhisar anti- senıınu kullamlarak. IFATile yapılan çapraz seroloJik reaksiyon testlerinin sonuçları Lıhle 2 The results ofserological eross reaetion tests performed between the antigens of Twınulıı/ıı isolates froın dıilcrenl

villages of Ankara and the antisera against TW1I1U/U/U Balçıkhisar stoek

Antı-senım

'-.~ :/o Gl

~

---

..c ,:;L oc :.>-:ıç :-:ı o:ı

87-75 (Gülseren) 87-77* (Bala-TIGEM) 88-103 (Emırler)

Günler S.Ag. P.Ag. S.Ag P.Ag SAg P.Ag

O 17 1:640 1320 IAO 15120 28 1:5120 1:2560 1:2560 11280 12560 i 111240 35 1:5120 i: 10240 15120 i :2560 1:2560 i 111240 42 i :i ll2L10 i:10240 1:5120 12560 1:5120 i 111240 50

ı:

10240 1:10240 i:12S0 1:5120 1:2560 i 111240 63 1:5120 1:5120 i:1280 15120 1.12S0 12S60 73 1:2560 1:2560 1:640 15120 1640 12560 91 1:2560 1:2560 1:640 15120 !640 12560 104 12560 i: i 280 1:640 1:5120 1:320 11280 119 1:2560 1:12S0 1640 1:2560 1320 i 12S0 133 1.1280 i:i 280 1:640 i:12S0 1:320 1640 145 1320 i: 1280 1:320 i: i2S0 1320 1640 161 180 i:

ı

2S0 1:320 i: 1280 1320 lô40

ıso

i: 1280 1320 i: 12S0 1:320 1320

S.Ag.: Şizonı antijen. P.Ag.: Piroplazın antijen, -: i'o'egatif reaksiyon, *: Doğalolarak enfekte oldu. lFA'!" Indırek Flores,1l1 Al\\ıkor Testı S.Ag.: Sehizoııt ,tııtigen, P.Ag.: Piroplasm antigens, -: :\Iegatiye reaetion. *:Iı was infeeted ın fıeld. If AT Iııdıreeı tıııoreseent antibody test.

213

Sonuçları Tablo 2'de özetlenen deneyde

Thei!eria wınu!ata- Balçıkhisar kan stabilatı ile enfekte danadan elde edilcn anti- serum

Tannu!ata- Gülseren ve Tal1nu!ata- Emirler kan stabilatı ile enfekte danalarla, doğalolarak

Tannutara (Bala-TlGEM) ile enfekte danadan hazırlanan heterolog şizont ve hetcmlog pi-roplazm antijenleri ile test edildiğinde, hep-siyle, oldukça yüksek titrede reaksiyon vcr-miştir. Orijinleri farklı hetemlog antijenlerlc oluşan reaksiyon titreleri arasında çok önemli bir fark görülmemiştir. Bu deneyde de pi-roplazm antijenleri ile yapılan testlerdc, şizont antijenine kıyasla, antikor titreleri yüksek bu-lunmuştur. En erken. enfeksiyonun ITinci gü-nünde, kanda antikora rastlanmıştır. Kandaki antikor miktarı enfeksiyonun 28'inci günündcn itibaren artmaya başlamış, 35-42'inci günler arasında maksimum düzeye çıkmış ve sonra azalmaya başlamıştır. Enfeksiyondan yaklaşık 6 şizont ve piroplazm antijenleri ile, giderek artan titrelerde reaksiyon vermişlerdir.Enfcksiyondan sonra 3S'inci günde antiserumda mevcut antikor titrcleri, şizont antijeni ile 1:5 i20, piroplazm antijeni ile 1:2560 olarak bu-lunmuştur.Enfeksiyonu 35'inci gününden sonra şizont antijeni ile saptanan antikor titrelerinde düşüş görülürken; piroplazm antijeni ile sap-tanan antikor titrelerinde SO'inci güne kadar yükselme ve 104'üncü günden sonra düşme gö-rülmüştür. Nihayet enfeksiyondan i 80 gün sonra alınan antiserumdaki antikor titresi şizont antijeni ile 1:320, piroplazm antijeni ile i: i

no

olarak saptanmıştır.

Aynı (88-102) numaralı danadan en-feksiyondan i7 gün sonra alınan antisenım,

Tannu!ata- Emirler kan stabilatı ile enfektc 88- . 103 numaralı danadan hazırlanan hetorolog şi-zont antijeni ile 1:40, heterolog piroplazm an-tijeni ile 1:5120 titrede reaksiyon vermiştir. Bundan sonra anti- serumda antikor titreleri yükselmeye başlamış, 28'inci günde piroplazm antijenleriyle i: 10240, 42'inci gündc şi70nt an-tijeni ile i:5120 olarak saptanmıştır. Ellinci günden sonra antikor titreleri düşmeye baş-lamış, enfeksiyondan 180 gün sonra gerek şi-zont ve gerckse piroplazm antijenleriyle sap-tanan antikor titresinin i::~20 olduğu görülmüştür.

Thei!eria al1l1u!at{{ (Bala-TlGEM) ile doğalolarak enfekte olan 87-77 numaralı da-nadan hazırlanan heteralog şizont antijeni, 88-i02 numaralı danadan enfeksiyonu izleyen ITinci günde alınan antiserum ilc test edil-diğinde reaksiyon vermemiş, piroplazm antijeni ile i:320 titre'de reaksiyon vermiştir. En-feksiyonun 28'inei gününden sonra alınan an-tiserumlar, aynı danadan hazırlanan hcterolog

Tablo 2'de görüldüğü gibi,

Tanl1u!ata-Balçıkhisar kan stabilatı ilc enfekte edilen 88-i02 numaralı danadan enfeksiyonu izleyen ITinci günde alınan antiserum,

Tanl1u!ata-Gülseren kan stabilatı ile enfekte 87-75 nu-maralı danadan hazırlanan heterolog şizont an-tijcni ilc test edildiğinde reaksiyon vermemiş, fakat piroplazm antijeni ile 1:640 tİtrede re-aksiyon vermiştir. Enfeksiyonun 28'inci gü-nünden itibaren antikor titresi tedricen yük-selmeye başlamış, 42'inci günde zirveye çıkmış (I. i0240- i. 1(240), S()'inci günden itibaren ted-ricen azalmaya başlamış ve 180'inci günde şi-zont antijeni ile negatif reaksiyon saptanırken, piroplazm antijeni ile antikor titresinin 1: i280 olduğu tespit edilmiştir.

Ai\; KARA YÖR ESINDEN ELDE EDILEN THElLER1A ANNUl.A TA (Dschıınkowsky and LlIhs, 19(4)

IZOLATLARI ÜZERINDE ARAŞTIRMALAR

Sonuçları Tablo i'de de özetlenen de-neyde, TW1I1u!ut{{- Gülseren kan stabilatı ile enfekte danadan alınan antiserumun, homolog

TUlınu!{{ta- Gülseren şizont ve piroplazm an-tijenlcri, heterolog T{{nnu!ata- Bala (TlGEM) ::iimnt ve piroplazm antijenleri ve heterolog

TWlI7u!af{/- Emirler şizont ve piroplazm an-tijenlcri ile test edildiğinde, hepsiyle reaksiyon verdiği anJa::iılmıştır. Homolog ve heterolog an-t(jenlerle mcydana gelen antikor titreleri ara-sında çok önemli bir fark gö-rülmcmiştir.Bununla beraber şizont antijeniyle olu::ian antikor titresinin, piroplazm antijenine kıyasla, daha düşük olduğu tespit edilmiştir. Dcneysel olarak enfekte edilen danalarda

Tannu!ata'ya kar::il olu::ian antikor, azalmakla beraher, bir yıldan fazla kandaki varlığını sür-dürmü~tür. Enfeksiyondan en erken 17 gün sonra kanda antikor bulunmuş, genellikle en-feksiyonun 28'inci gününden 42'inei gününe kadar kandaki antikor miktarında artış olmuş, daha sonra tedricen azalmıştır. Genellikle en-feksiyonun 35-42'inci günleri arasında kandaki antikor maksimum seviycye ula::imıştır.

21~ F.SAYIN. Ş.DINÇER. Z.KARAER. A.ÇAKMAK. kINCI. BAYUKARı' H.EREN

ay sonra yapılan testlerde bütün antiserum ör-neklerinde oldukça yüksek titrede antikor bu-lunmu~tur.

Tablo 3'de görüldüğü üzere, T.annulata Er-yaman-2 kan stabilatı ile enfekte 88- 104 nu-maralı danadan enfeksiyondan 17 gün sonra alı-nan antiserum, TWlIlulata- Gülseren kan stabilatı ilc enfekte R7-75 numaralı danadan ha-zıırlanan hetcrolog şizont antijeni ile reaksiyon vermemiş, heterolog piroplazm antijeni ile 1:40 titrede reaksiyon vermiştir. Enfeksiyondan sonra 62'inci güne kadar yapılan yoklamalarda antisenım, heterolog şizont antijeni ile re-aksiyon vermediği halde, heterolog piroplazm antijcni ile yüksek titrclerde (l :40- 1:5120) re-aksiyon vermiştir. Altmışikinci günden sonra şizont antijeni ile çok düşük titrclerde (1:

10-i:40) reaksiyon vermiştir. Fakat piroplazm an-tijeni ilc yüksek titrelerde reaksiyon vermeye devam etmiş, 132'inci günden sonra titre düş-mıiştür. Enfeksiyondan 193 gün sonra alınan antiserumda, şizont antijeni ilc 1: 1O titrede, pi-roplazm antijeni ile 1:320 titrede antikor bu-lunabilmiştir.

Aynı (R8-1 04) numaralı danadan, en-feksiyondan 17 gün sonra alınan antiserumda,

T.amlUlata (Bala- TİGEM) ile doğal enfekte 87-77 numaralı danadan hazırlanan heterolog

r

i-roplazm antijeni ile 1:320 titrede antikor bu-lunduğu halde, hetcrolog şizont antijeni ilc ancak enfeksiyondan 75 gün sonra alınan an-tiserumda 1: 10 titrede, antikor tespit edilmiş. enfeksiyonun 28-117' inci günleri arasında alı-nan antiserum örneklerinde ise heterolog pi-rop1azm antijeni ile oldukça yüksek titrelerde (l :2560) antikor saptanmıştır. Fakat hetcrolog şizont antijeni ilc ancak enfeksiyonun 75'inci gününden sonra alınan antiserumlarda ı;ok düşük tİtrede (1:10-1:160) antikor tespit edi-lebilmiştir. Enfeksiyondan 193 gün sonra alınan serumda antikor Iİlresi, heterolog şizont antijeni ile 1: 10, hetcrolog piroplazm antijeni ile 1:640 olarak saptanmıştır.

Aynı danadan (88- i04 numaralı) en-feksiyondan 17 gün sonra alınan antiserum,

Tannulata-Emirler kan stabilatı ile enfekte 88-103 numaralı danadan hazırlanan hctcrolog pi-roplazm antijeni ilc 1:80 titrede reaksiyon

vc-Tablo 3: Ankara'nın çeşili köylerinden elde edilen Theileria aııııulala izolatlarına ait şizont ve piroplazın antijenlerı ile

T.(l/I/ıu/a/a Eryaınan-2 antisenımuntl kullanarak IFAT ile yapılan çapraz serolojik reaksiyon testlerinin .sonuçları Table 3 The resulıs of serologieal cross reaction tests performed between the antigeııs of Tmıııu/a/a isolaıes from dillerenl

villages of Ankara and the antisera against Taıınulala Eryaman-2 slock

Anll-scnım N

~

_c

~

-"

E

c-<:l :xl >, oc

"-LLL

87 -75 (Giilseren) 87-77* (Bala-T1GEM) 88- i 03 (Emirler)

Giinler S.Ag. P.Ag. S.Ag P.Ag SAg P.Ag

O 17 1:40 1:320

ıso

28 1:5 i 20 1:2560 112S0 35 1:5 120 1:2560 12560 42 1:2560 1:2560 12S60 'iO 1: 12S0 1:2560 ııS60 62 110 i: i 2S0 12560 12S60 75 1:10 1: i 280 i :i O 1:2560 12S60 89 1:20 i: L2S0

ı:

160 1:2560 1160 12S60 103 120 II 280 1:160 1:2560 l640 12560 117 1:40

ı

:640 i: 160 1:2560 i: 160 12S60 132 i :SO 1640 1:40 11280 1.160 112S0 146 !'dO 1:640 1:40 1640

ı

:SO i 1280 IS8 IAO 1640 1:40 1:640 1:40 1640 173 IAO 1:640 1:20 1640 i :40 1.320 193 110 1:320 1:10 1:640 1:40 i 320

S.i\g. Şizont antijen. P.Ag.: Piroplazın anlijeni, dIrek Flores,ııı Antikor Tesıı

In-ANKARA YÖRESINDEN ELDE EDILEN THULER/A ANNUUıTA (Dschunkowsky and Luhs. !9(4) IZOLA TLARI ÜZERINDE ARAŞTIRMALAR

ll5

rirken, heterolog şizont antijeni ile reaksiyon vermemiştir. Enfeksiyonun 28- i 17 günleri ara-sında alman antiserumlarda heterolog pi-roplazm antijeni ile tedricen yükselen titrelerde (i:i280-

i:

2560) antikor tespİl edilmiştir. Hal-buki hetcrolog şizont antijeni ile enfeksiyonun 89' uncu gününden sonra alınan antiserumlarda ancak, düşük titrelerde (i: 160) antikor sap-tanabilmiştir.Enfeksiyondan

i

93 gün sonra alı-nan antiscnımda, hetcralog şizont antijeni ile i 40,heterolog piroplazm antijeni ile 1:320 tİl-rclcrde antikor bulunmuştur.

Tablo 3' de özetlenen verilerin de-ğerlendirilmeleri de ilk iki tablodan çıkarılan sonuçları doğrular niteliktedir. Ayrıca an-tisenumın piroplazm antijeni ile, şizont an-tijenine kıyasla, daha erken zamanda daha yük-sek titrede reaksiyon verdiği, bu deneyde daha belirgin şekilde ortaya ÇıkmıŞtır.

Bunlara ilaveten, Tablo 4'de görüldüğü gibi,

Taııııu!ata-

Gülseren kan stabilatı ile en-fekte 87-75 numaralı danadan enfeksiyonu ta-kihen iTinci günde alınan antiserum,

Tannu!ata-

Balçıkhisar ve

Taııııu!atu-

Köseli kan stabilatları ile enfekte edilen i02 ve 88-iOi numaralı danalardan hazırlanan heterolog piroplazm antijenleri ilc reaksiyona sokulımış ve bu serumda hetcralog her iki antijenk yük-sek tİlrede (l :2560) antikor saptanmıştır. En-feksiyonun 28 ve 35'inci günlerinde alınan an-tiserumlarda, her iki antijenle yapılan testlerde, antikor titresinin tedricen yükseldiği (1:5

120-i:

10240) görülmüştür. Enfeksiyondan sonra 68 ve daha sonraki günlerde alınan antisenımlarda, yine her iki antijenle yapılan testlerle, antikor titresinin tedricen azaldığı saptanmıştır. En-feksiyondan 347 gün sonra alınan antiserumda antikor titresinin, testtc kuııanılan antijene bağlı olarak, 1:640 ve 1:320 olduğu anlaşılmıştır. Ne-tice olarak, bu testte antisenım, heterolog pi-raplazm antijenlerinin her ikisi ile de pozitif re-aksiyon vermiştir. Her iki heterolog antijenlc elde edilen reaksiyon titrelerinin birbirine yakın ancak, her ikisinin de düşük düzeyde olduğu tespit edilmiştir.

Tannu!ata-

Balçıkhisar kan stabilatı ilc en-fekte 88- i02 numaralı danadan, enfeksiyondan

-Lıblo

cı

Anbra'nll1 deği~ık köylerinden elde edilen Tht'i/t'riu uııııu/ulu kan stabihHları ile enfekte edilen (!analardan ~ı1ln~ln ~ııııısenıııı ilc aynı veya farklı danalardan hazırlanan homolog veya heterolog Twuıu/uru pıroplazm aıııi]enlerı arasıI1lhliFA T

ilc yapılan çapraz reaksiyonların sonuçları

Tabk 4: The results of serologieal erass rcaetion tests perl'ormed bctwcen homologous or hetorolagous Tmıııu/u/u rlll'opl~ısııı aıııigens and the antisera obtained from calves with T.UJlIlU/UIa hlood stabilatcs whieh were colleetcd from dı.seasecl raltle 111

different villages of Ankara

Antı-seruııı r-x :::ı

C.J

88-102 88-Loi Balçıkhisar Köseli Piraplazııı Piroplazm Gıinler (Antı]eııi) (Antijeni)

O Negatif Negatif 17 1:2560 i :25()O 28 1:5120 i: 10240 35 i:

ı

0240 1:5

ı

20 42 i •10240 1:2560 .'lO 1.10240 12560 68 15120 1:2560 115 15120 12560 176 ısl20 1:2560 21()

_ı

:5120 i: 1280 23() 15120 11280 27() 1:2560 i: 1280 31 i 1:1280

ı

:640 325 i: i 280 1:320 347 1:640 1:320 Antisenım ı-. ro

'"

N

o

_..c ..><: 00 c..>-00 ro ÇQ 88-102 8R-IOI Balçıkhisar Köseli Piroplnııı Pıropl~l/I11 Giinler (Aıııijeııı ) (Aıııijenı)

O f\egati

r

i'cg;ıli

r

17 1:5120 1.120 28 i: 10240 i 25()O 35 i: 10240 i 25()O 42 i: 10240 12560 50 1:20480 12560 63 i:20480 1-12XO 77 110240 12560 91 i -10240 i.2560 104 1:10240 i 256() 119

ı

:J()240 12560 113 1:5120 i !280 145 1:5

ı

20 1640 161 1:5120 1640 180 12560 1:120

216 FSA YıN, Ş.DINÇER, Z.KARAER. AÇAKMAK. A.INCI. B.A.YCKARL. H.ERE!':

ı

7 gün sonra alınan antiserum, aynı danadan

hazırlanan homolog piroplazm antijeni ve

Tw1I1ulutu- Köseli kan sıabilatı ile enfekte 88-i

°

i numaralı danadan hazırlanan heterolog pi-roplazm antijeni ilc sırasiyle 1:5

i

20 ve 1:320 tilrelerinde reaksiyon vermiştir. Enfeksiyonu iz-leyen 28-63 'üncü günler arasında alınan an-ıiserum örneklerinde, homolog ve heterolog pi-roplazm antijenleriyle yapılan testler, antiserumlar antikor titresinin ledriei olarak yükseldiğini göstermiştir. Altmışüçüncü gün-den sonra alınan antiserum örneklerinde, yine homolog ve heterolog piroplazm antijenleri yar-dıımyk yapılan saptamalara göre, antikor tit-releri haşlangıçta hir süre aynı düzeyde kalmış, daha sonra tedricen azalmıştır. Enfeksiyondan i 80 gün sonra alınan antiserum örneğinde an-ıikor tiıresi homolog antijenle 1:2560, heterolog anıijenle i: 320 olarak tespit edilmiştir.

Bu testtc antiserumlar hem homolog ve hem de hetcrolog piroplazm antijeni ilc pozitif reaksiyon vermiştir. Bununla be rahel' homolog antijenle meydana gelen reaksiyonların titreleri, hcıcrolog antijenle oluşan tİtrelere göre kısmen daha yüksek hulunmuştur.

Diğer taraftan Tablo 5 'te belirtildiği şe-kilde T.annuluta- Gülseren, Tannulata- Emir-!cr, Tannulata- Balçıkhisar, Tannulata-

Er-yaman-2, Tal1lwlata- Eryaman- i ve

Tannulata- Hıdırşıh kan stabilatları ilc enfekte edilmiş sırasiyle 87-75, 88-103, 88-102, 88-104,86-101 ve 86-115 numaralı danalardan en-feksiyondan 28 gün sonra alınan antisenımlarla,

Tannulata- Gülseren, Twınulata- Emirler,

Tal1l1ulata- Balçıkhisar ve T.w1I7ulata- Köseli kan stabilatları ile enfekte edilmiş sırasiyle 87-75, 88- 103, 88- 102, 88- LO

i

numaralı danalarla,

Tannulata (Bala-TİGEM) ile doğal enfekte 87-77 numaralı danadan hazırlanan piroplazm an-tijenleri IFA testiyle çapraz reaksiyona so-kulmuşlar, neticede yukarda sıralanan bülün an-tiserumların yine yukarda belirtilen bütün antijenlerle oldukça yüksek tİtrelerde reaksiyon verdikleri görülmüştür. Homolog olan an-tiserum ve antijenlerin birbiriyle lest edil-meleriyle meydana gelen antikor titreleri (altı çizili olanlar) ilc heterolog olan anıiserum ve antijcnlerin test edilmesiyle ortaya çıkan an-tikor titreleri arasında (allı çizilmemiş olanlar) önemli bir fark görülmemiştir. Bu dunım lestte kullanılan antijenler arasında da bir suş fark-lılığının olmadığı şeklinde algılanmıştır.

Tartışma

Theileria annulata enfeksiyonunda, sc-rumda Tannulaw anıijeni ile reaksiyon veren, özgün antikorların oluştuğunu, İndirek Floresan

Tablo 5 Ank<ll"a'nın deği~ik köylerinden elde edilen Theilericı aııııulala kan stabilatları ile enfekte danalardan alınem an-liserııııılar ve hazırlanan piroplazın antijenleri arasında IFAT ile yapılan çapraz serolojik reaksiyonların sonul;ları Table 5: The results of serological eross reacıion tests performed between the piroplasın antigens and the antİsera obtained

froııı the infected calves with Taııııulata blood stabilates from different viııages of Ankara Çe~itli piroplazm antijenleri ile çaprazlFA testleri

R7-77**

87-75 Ta-Bala 88-103 88-102 8R-IOI

Ta-Glilseren (TIGEM) Ta-Emirler Ta-Balçıkhısar 'Lı-Köselı

Antıserııııı PA" PAg Pag PAg Pag

"'

87-75 (Gıılseren)" ısl20

ı

:1280 1:5120 15120 15120

RR- i 03 (Emirler) i:

ı

280 1:2560 1:2560

ı

:2560 12560

R8. 102 (Balçıkhısar) 1:2560 1:12RO i: 10240 1:10240 i 10240

88-104 (Eryamaıı-2) 15120 1:2560 i:

ı

280 1:2560 12560

X6-IOI (Eryanıaıı-I) 12560 1:640 1:5120 i: 10240 i Im40

K6-115 (Hıdır~ıh) i: 1280 i:12RO 15120 ısl20 15110

T,,: Tlıeıkrİa annulala. Pi\g: Piroplazın antijcni. lFA: Indirekt f10resan Amikor Testi D"ııaların ino-k\\\asyon\\nde\\1 28 gün sonra elde edileıı aııliseruınlar. '''': Doğalolarak enfekte oldu, Ta.: T.wıııulaıa .PAg. Pıropla.,sııı amigens. lFA: ındİreeı Fluorescent i\ntibody Test, *:The antisera which were ohtained 28 day.s aner inocuialıoıı of the caJves wİth Taııııulala hlood stabilate **:The ealf which became infeetccl with Twıııulaıa in field

217

Bu çalışmada da yukardaki bulgulara ben-zer sonuçlar alınmıştır. Deği~ik orijinli

Tannulata

kan stabilatlarıyla enfektc da-nalardan hazırlanan ~izont ve piroplazm an-tijenleri ile bu danalardan alınan antiserumlar test edildiğinde: Antiserumlarda antikorların varlığı piroplazm antijeni ilc, şizont antijenine kıyasla, daha erken safhada anlaşılmı~ ve an-tikor tİlreleri daha yüksek scviyede bu-lunmuştur. Genellikle

Tannulata

enfeksiyonu geçiren danaların antiserumunda bir yılı aşkın bir süre içinde antikodarın varlığı ka-nıtlanmıştır. B ununla beraber zaman geçtikçe antikor tİtrderinin tedricen azaldığı gö-rülmüştür. Diğer taraftan deği~ik orijinli

Tannu/ata

enfeksiyonu geçirmiş danalardan alınan antiserumlar homolog ve heterolog an-tijenlerle çapraz teste tabi tutulduklarında hep pozİtif reaksiyon meydana gelmi~tir; hu re-aksiyonlarda saptanan antikor titre/eri arasında önemli bir farklılık görülmemiştir. Böyleec de-ği~ik kökenli

Tannulala

kan stabilatlarının an-tijenik yapılarının benzer olduğu sonucuna va-rılmıştır.

Kaynaklar

i. Adler,E., Ellenbogen, V. (1935) Observdtıon on tlıe theileriosis in Palistine. Arch Inst Pasteıır. X"

ı.

451-470. AIger.

2. Çakmak, A. (I 987) lJntersııchungcn zur inzidenl. von Hiimoparasiten in einer Rinderherde in dcr provinz Ankara. Vet Med Diss Hannover. Tier,irl.ti Hohsch. pp. 133.

3. Dbar,S., Gautam,O.P. (1977) Indireet Iluore,eent <ın-tibody test for scrodiagnosis İn caltle infeeted wıtlı Taııııula/a.lmlian JAnim Sei. 47.11. nO-723. 4. Uihr,K. ••.., Ross~J.P.J. (1969) Serological response in

cattle to East Coast Fever (Theilf:'ria Ih/l'I'o ınfecıion) as mcasured by the indireet f1uoreseent anıibody test. Res Vet Sci. 10.453-460.

5. Pipann,E., Cahana,M. (I 968) Measurenıent of the immune respolise to vaccine from ıissue eııltures of Theilahı aııııulata by the Iluorescent <ıııııbody test. J Protozool 15. Suppl p. 45.

6. Pipano,E., Hadani,A. (ı974) Epıdemiologieal ~ınd imınııııologieal aspeets of TWlIıula/(l infecııoıı. Pro-eeedings of the third internatıonal congress ün pa-rasitology. Munehen.

ı.

14(J-141.

7. Pipano,E., Goldman,M., Samish,M., Fricdhoff,K.T. (I 977) Immunisation of eattle against Tmıııula/a ll.sing kill schizoııt vaccine. Vet Parasitol. 3.i. 11-22.

8. Rafyi,A., Maghami,G., Hooshmand,P. (I 965) Tlıe vinılence of Theilahı all/lUlota and prenıullıtion aga-iııst bovine theilenosis in Iran.Bull 01'1' IllI EpllOot 64. 431-446.

ANKARA YÖRESINDEN ELDE EDILEN THElu'R1A ANNULATA (Dschunkowsky and Luhs. 19(4)

IZOLATLARI ÜZERINDE ARAŞTIRMALAR

Anlikor Testi (IFAT) ile kanıtlayan bir çok ara~lırıcı (3,5) mevcuttur. Pipano ve Cahana (S) bu metodu kullanarak

Tannulata

ile a~ılanan danaların serumunda, a~ılandıktan i0- i8 gün sonra, antikor saptamışlardır. Dhar ve Gautam

(3) ~jzonı ve piroplazm antijenlerini kullanarak lFA testi ile yaptıkları çalışmalarda

Tannulata

inoklilasyonundan 23-43 gün sonra danaların senlinunda antikor bulmuşlardır. Diğer taraftan Pipano ve Cahana (5)

Tannulata

ile inoküle edilen danalarda, inokülasyondan sonra, 32-52'inci günlerdc antikor titresinin zirveye çık-tığını belirlemi~ler, alınan antiserumlarda an-tİkor ti lresini i: i 000 olarak saptamışlardır. Hal-buki Dhar ve Guatam (3) inokülasyondan 23-43 gün sonra ıitreyi 1:640-

i:

1280 olarak bul-ımışlardır.

Bu çalı~mada yapılan deneylerde, pi-roplazın antijcni kullanılarak, genellikle ino-külasyondan en erken i7 gün sonra an-ıiserumIarda antikora rastlanmıştır. İnokülasyondan 28-42 gün sonra antikor tİt-resinin artarak zirveye ulaştığı görülmüştür. Bu süre içinde antikor tİlrcsi en fazla 1: 10240 01-ıml~tuL Fakat çoğunlukla tİtreler 1:5 i20 dü-zeyinde kalını~tlL

Löhr ve Ross (4) lFA testini

Theileria

jJurvu

enfeksiyonunun saptanmasında

kul-1<ınmışlardır. Bu araştırıcılar (4) bu parazite kar~ı duyarlı i80 danada antikor bulamadıkları halde aynı parazitle enfekte ettikleri 70 dananın serumunda, inokülasyondan i-4 ay sonra yük-sek litrede antikora rastlamışlardır. Testte kul-lanılan piroplazın ve ~izont antijenlerinden bi-rincisini, ikincisine göre, sonuçların doğruluğu ve sabitliği açısından, üstün hulmu~lar,

Tparva

enfeksiyonuna yakalanmış sığırlardan toplanan antiserumlarla yaptıkları testlerde çapraz re-aksiyona rastlamışlardiL Yani

Tparva

antijeni kullanarak,

Tlu'vvrancei

ve

Tparva

ilc enfekte sığırlardan aldıkları antiserumlarla testler yap-mışlar ve hu antiserumların antikor titre1eri ara-sında herhangi bir fark görmemişlerdir. Fakat

TmUlW1S ilc enfekte sığırlardan topladıkları

se-rumIarda antikor titrelerinin daha düşük ol-duğunu tesbit etmişlerdir. Schindler ve Mehliz (I 3) lFA testi ile

Tparva

ve

Tmulans'a

aİl an-tiserumlar arasında çapraz reaksiyonun var-lığını saptaml~lardır.

218 F.SA YıN, Ş.DINÇER. Z.KARAER. A.ÇAKMAK, A.I~Cl. B.A.YUKARI. l.lEREN 9 Ra~uıov,I.K. (1963) Immunohiological properties of

,traiııs of Twl/ıu/atu. Vet Moscow. 6. 52-53 (Ref Vet 13u II 3. I. i 7. i 964).

LO. Sayın,F., Dinçer,Ş., Karaer,Z., Çakmak,A.,

İnd,A ..Yuk<ırı, RA., Eren,H., Ünsüren,H. (1999)

Ankeıra yöresinden elde edilen TheiLeria wıııu/alil

(D,clıunkow,ky ~lI1d Luiı,. 19(4) izolatları üzerinde ard')llrll1dlar. I. Duyarlı danalarda enfekte kanla oluş-lUrlll,lI1 ıropıkal ıheileriosis'den ileri gelen ınorbidite ve illortdiııe OldYldrı. T Parasitol Derg. 23. 2. i78-i84.

i i S<ıyın, F., Dinçer,Ş.,.Karaer,Z., Çakmak,A.,

İııci,A.,Yukarı, B.A., Eren,H., Ünsüren,H. (1999).

Ankara yöresinden elde edilen TheiLeriu wıııuLalil

(D,chunkowsky and Luiıs. 19(4) izolatları iizerinde &dşıırıııalar. 2. Ankara yöresinden Twıııu/uw'nın izo-lasyonu ve hücrc külıüriiniin yapılma,ı. T Para.siıol Dcrg (4/99 Bask ıda).

ı

2.Sergent,K, Don<ıtien,A., Parrot,L., Lestoquard,F.

(I 945) Etudes sur les Piroplasmoses Bovıncs. In,t Pas-tcur d' AIgerie. Alger.

13. Sehindler, R., Mehlitz, D. (I 969) Serological sıudies on Thei/eriu //lutilllS infcction in catllc. Z Tropenıııed Parasit. 20. 459-473

14.Subramanian,G., l'Iaithani,R.C., R<ıy,D. (1987)

Cross-reaetion among four isolates of Theileriii

((11-lıu/aW from Indıa. Vet Parasitol. 25.75-77.

Yazışma Adresi:

pror Dr. Şükraıı Diııç'er

Ankuru Üııiversitesi Veteriner Fakü/tesi Protozo%;i ve !::ııto//l%;i Bilim Du/ı 06110 Dı,~kapı/ANKARA